金线莲中一株内生真菌活性成分研究

摘要

植物内生真菌是新化合物和生物活性小分子的重要来源，且能产生出与宿主植物中相同或相似的生物活性成分。通过人工培养药用植物中的内生真菌，可从中寻找具有低毒性且结构新颖的活性化合物，从而对濒危药用植物资源起到积极保护作用。金线莲为福建省道地药材，目前针对于金线莲中内生真菌相关研究较少。在前期试验中，从93株金线莲内生真菌中筛选出三株具有ERα激活活性的菌株ARL-13、ARL-09和ARTCL-05，其中菌株ARL-13具有特异性的ERα激活活性。本课题主要目标是从ARL-13菌株中分离纯化出能激活ERα转录活性化合物，并验证其是否具有特异性激活ERα转录作用。
　　本课题采用PDA培养基对菌株ARL-13进行大规模固体发酵，经过提取、浓缩、萃取后，得到粗提物浸膏。利用正相硅胶色谱柱、ODS中低压色谱柱、葡聚糖凝胶色谱柱、重结晶、分析型和制备型HPLC等现代分离分析技术对浸膏进行分离纯化得到7个化合物。利用现代光谱技术，如MS，IR，UV和NMR等技术对所获得的单体化合物进行结构鉴定，得到5个双苯吡酮类的化合物，1个异香豆素类化合物，1个酚酸类化合物，其中化合物1为新天然产物。
　　本文采用Dual-Luciferase双荧光素酶报告基因检测系统通过测定荧光素酶的相对活力的强弱来评估单体化合物能否激活ERα的转录活性。活性测定结果表明:化合物4和化合物5具有一定的激活ERα的转录活性，化合物4活性强于化合物5，且化合物4的激活作用呈浓度依赖性。另外化合物4对ERα转录功能存在特异性的调控作用，化合物4在10μM条件下激活pBIND-ERα-LBD的转录活性可达到10nM时阳性药雌二醇E2激活的一半。利用荧光分光光度计进行荧光滴定，进一步证实化合物4能与ERα-LBD结合，结合常数为5.02～6.92×10-7M-1。通过构效关系讨论提示3位羟基可能为活性基团，而3位羟基甲基化后可能对ERα转录活性具有一定抑制作用。
　　以金线莲中内生真菌为研究对象，对发现新的天然产物和丰富次级代谢产物具有重要意义，同时也是发现新的活性物质的重要源泉，为后期激活ERα机制研究奠定了一定的化学基础。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 内生真菌

1．2 金线莲概述

1．3 雌激素受体

1．4 立题依据

第二章 ARL-13菌株的化学成分研究

2．1 材料和仪器

2．2 提取与分离方法

2．3 化合物的结构鉴定

第三章 ARL-13菌株鉴定及化合物生物活性评价

3．1 ARL-13菌株rDNA基因ITS区的测序分析

3．2 化合物的生物活性评价

第四章 总结与讨论

4．1 总结

4．2 讨论

参考文献

附录

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致谢