硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法

摘要

本发明属于细胞模型技术领域，涉及硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法。所述的建立方法是在体外培养后的仓鼠卵巢细胞的培养液中加入硝酸铀酰溶液，继续体外培养一段时间。利用本发明的硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，能够操作简单、成本低的建立硝酸铀酰诱导的仓鼠卵巢细胞氧化应激模型，从而可进一步用于硝酸铀酰对生殖系统的毒性损伤作用机制和抗氧化机制的研究。

说明书

技术领域

本发明属于细胞模型技术领域，涉及硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法。

背景技术

硝酸铀酰是一种重金属放射性物质，具有重金属毒性和放射毒性双重毒性。与放射毒性相比，化学毒性是硝酸铀酰的主要危害。化学毒性和放射毒性在机体受毒性损伤的过程中发挥相互干扰、相互促进的作用。当硝酸铀酰处于低剂量慢性暴露的状态下，在人和动物体内会引起一系列毒性效应，如神经毒性、呼吸毒性、生殖毒性、遗传毒性甚至是癌症等，影响生物体内包括解毒作用、氧化应激、DNA损伤修复等多个方面。在分子水平已证实硝酸铀酰的毒性损伤可导致细胞内氧自由基失衡及细胞膜结构变性、干扰细胞信号转导、诱导细胞凋亡、发生炎症反应以及基因突变等。而生殖器官是硝酸铀酰最主要的毒性作用靶器官和蓄积器官之一。仓鼠卵巢细胞易于培养、成本低，是目前生物工程上广泛使用的细胞。因此，为了阐明硝酸铀酰对生殖系统的毒性损伤作用机制，适宜采用仓鼠卵巢细胞建立可靠的细胞模型。

发明内容

本发明的目的是提供硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，以能够操作简单、成本低的建立硝酸铀酰诱导的仓鼠卵巢细胞氧化应激模型，从而可进一步用于硝酸铀酰对生殖系统的毒性损伤作用机制和抗氧化机制的研究。

为实现此目的，在基础的实施方案中，本发明提供硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，所述的建立方法是在体外培养后的仓鼠卵巢细胞的培养液中加入硝酸铀酰溶液，继续体外培养一段时间。

在一种优选的实施方案中，本发明提供硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，其中所述的体外培养和继续体外培养的培养基是含质量体积比浓度10％的胎牛血清的F-12K培养基。

在一种优选的实施方案中，本发明提供硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，其中所述的体外培养和继续体外培养为在37℃，5％CO

在一种优选的实施方案中，本发明提供硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，其中所述的体外培养后仓鼠卵巢细胞的浓度为5-10×10

在一种优选的实施方案中，本发明提供硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，其中所述的硝酸铀酰的浓度为1-500μmol/L。

在一种优选的实施方案中，本发明提供硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，其中所述的继续体外培养的时间为12-72h。

在一种优选的实施方案中，本发明提供硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，其中所述的继续体外培养后还进行细胞存活率检测。

在一种更加优选的实施方案中，本发明提供硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，其中所述的细胞存活率检测采用CCK-8法。

在一种优选的实施方案中，本发明提供硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，其中所述的继续体外培养后还进行细胞LDH活性检测。

在一种更加优选的实施方案中，本发明提供硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，其中所述的细胞LDH活性检测采用微量酶标法。

本发明的有益效果在于，利用本发明的硝酸铀酰诱导的卵巢细胞氧化应激细胞模型的建立方法，能够操作简单、成本低的建立硝酸铀酰诱导的仓鼠卵巢细胞氧化应激模型，从而可进一步用于硝酸铀酰对生殖系统的毒性损伤作用机制和抗氧化机制的研究。

附图说明

图1为实施例1中硝酸铀酰染毒浓度对仓鼠卵巢细胞存活率的影响图。

图2为实施例2中硝酸铀酰染毒浓度对仓鼠卵巢细胞LDH活性的影响图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作出进一步的说明。

实施例1：硝酸铀酰染毒浓度对仓鼠卵巢细胞存活率的影响试验

1、细胞培养与染毒

分别设置对照组和不同浓度硝酸铀酰(50、100、300和500μmol/L)染毒组。仓鼠卵巢细胞培养于含10％胎牛血清的F-12K培养基，细胞浓度5-10×10

2、CCK-8法检测细胞存活率

继续培养12、24、48和72h后，弃去培养基，每孔加入100μl空白培养基和10μl CCK-8溶液，37℃、5％CO

由此得到硝酸铀酰染毒浓度对仓鼠卵巢细胞存活率的影响，结果如图1所示。图1表明，随着硝酸铀酰浓度的升高，细胞存活率逐渐降低；且随着作用时间的增加，细胞存活率也呈下降趋势。50、100、300和500μmol/L硝酸铀酰分别染毒12、24、48和72h，仓鼠卵巢细胞存活率均显著降低(P<0.05)。

实施例2：硝酸铀酰染毒浓度对仓鼠卵巢细胞LDH活性的影响试验

1、细胞培养与染毒：方法同实施例1

2、微量酶标法检测细胞LDH活性

继续培养24h后，弃去培养基，设置空白孔、标准孔、染毒孔和对照孔，用酶标仪测定450nm波长处的吸光度值，计算细胞LDH活性(细胞LDH活性＝[(染毒组OD值-对照OD值)/(标准OD值-空白OD值)]×标准品浓度(0.2μmol/mL)×稀释倍数)。

由此得到硝酸铀酰染毒浓度对仓鼠卵巢细胞LDH活性的影响，结果如图2所示。图2表明，随着染毒浓度的增加，LDH活性逐渐升高；50、100、300和500μmol/L硝酸铀酰染毒24h，仓鼠卵巢细胞LDH活性均显著升高(P<0.05)。

上述实施例中，实验数据采用SPSS 16.0统计分析软件进行单因素ANOVA方差分析，全部数据均以均数±标准差(means±SD)表示。当P<0.05认为有统计学差异。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若对本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其同等技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。上述实施例或实施方式只是对本发明的举例说明，本发明也可以以其它的特定方式或其它的特定形式实施，而不偏离本发明的要旨或本质特征。因此，描述的实施方式从任何方面来看均应视为说明性而非限定性的。本发明的范围应由附加的权利要求说明，任何与权利要求的意图和范围等效的变化也应包含在本发明的范围内。