基于脂肪酸燃烧的测定胰岛素抵抗性的方法及用于该方法的组合物

摘要

本发明提供一种测定受试者的胰岛素抵抗性的方法、以及适用于该方法的组合物。所述方法为下述测定受试者的胰岛素抵抗性的方法，即，使用用于测定胰岛素抵抗性的组合物，实施下述工序(a)及(b)，所述组合物以经至少一个同位素C标记的碳原子数为12～38的脂肪酸作为有效成分，所述脂肪酸在机体内被转化为标记二氧化碳而被排出至呼出气中，工序(a)为将上述组合物施予至受试者并采集呼出气，工序(b)为求出呼出气中含有的标记CO

说明书

技术领域

本发明涉及测定受试者有无胰岛素抵抗性的方法、以及适用于 该方法的组合物。具体而言，本发明涉及基于受试者的脂肪酸燃烧 而利用¹³C等标记C-呼气试验来测定及监测该受试者有无胰岛素抵 抗性的方法、以及适用于该方法的组合物。需要说明的是，上述“测 定受试者有无胰岛素抵抗性的方法”包含辨别高胰岛素血症受试者 是否为胰岛素抵抗性的方法。前者的情况可判断为“为胰岛素抵抗 性”，后者的情况可判断为“不伴有胰岛素抵抗性的高胰岛素血症 (下文中也称为“非胰岛素抵抗性/高胰岛素血症”)”。

本发明还涉及利用标记C-呼气试验来测定受试者的糖/脂肪酸 燃烧比(combustionratio)的方法、以及适用于该方法的组合物。

背景技术

通常，糖耐量异常是指空腹时的血糖值低于110mg/dl～126mg/dl 或口服葡萄糖负荷试验中的2小时值为140mg/dl～199mg/dl的状态， 也被称为临界性糖尿病(borderlinediabetes)。临界性糖尿病患者尽 管血糖值不正常，但也并非糖尿病，然而若置之不理则成为糖尿病 的可能性较高，因此也被称作糖尿病预备军。此外，已知动脉硬化 将从该阶段发展。因此，从预防医学的观点考虑，将该阶段的对象 患者筛选出来也是重要的。

另一方面，对于糖尿病的诊断，通常首先利用尿糖检查或空腹 时的血糖值检查进行初筛，在上述检查为阳性的情况下，进行葡萄 糖负荷试验，从而确诊。近来，有时也在使用葡萄糖的糖负荷试验 之前检查血中的HbAlC、果糖胺。

但是，使用葡萄糖的糖负荷试验不仅已被指出存在因摄取大量 葡萄糖而导致副作用的问题，而且由于需要对受试者进行历经数小 时的约束并反复进行采血，所以受试者的身体负担大，现实中只能 对有限的对象患者实施该试验。此外，HbAlC、果糖胺的结果直到下 次就医时才能知晓，故存在快速性不足的缺点。就作为其前阶段试 验的尿糖检查、空腹时血糖值检查等方法而言，由于许多糖尿病患 者的尿糖呈阴性，血糖值显示为正常值，因此也经常漏诊糖尿病患 者，其灵敏度低已成为问题。因此，通过这样的被用于糖尿病诊断 的现有方法，无法判定至糖尿病虽未发作但为糖尿病前阶段的状态， 例如临界性糖尿病、还尚未达到临界性糖尿病的状态(胰岛素抵抗 性的状态及不伴有胰岛素抵抗性的高胰岛素血症的状态)。

近来，作为糖尿病的诊断方法之一，提出了如下方法：静脉内 施予用¹³C标记过的乙酸、油酸或棕榈酸，利用呼气试验测定呼出气 CO₂中的¹³C浓度的增加率，由此来诊断胰岛素分泌不足型糖尿病(专 利文献1)。但是，通过上述方法是否能够诊断出还尚未达到临界性 糖尿病的状态(胰岛素抵抗性的状态及不伴有胰岛素抵抗性的高胰 岛素血症的状态)是不明确的。

此外，作为呈现胰岛素抵抗性的基础疾病，可举出肝疾病。尤 其是肝硬化患者在营养学上为蛋白质·能量营养不良(PEM， protein-energymalnutrition)的代表病态，在相当大比例的肝硬化患 者中并存有胰岛素抵抗性，对于胰岛素抵抗性的并存与肝癌的相关 性也已有报道。然而，诊断肝硬化患者中并存的胰岛素抵抗性的方 法尚未确立，要诊断PEM的程度时，存在间接热量计那样的检测糖 类与脂质的燃烧比例的方法。糖类与脂质的燃烧比例可以以呼吸商 (respiratoryquotient)的形式算出，已有报道称，当由于糖类的燃 烧下降/脂肪的燃烧亢进而导致呼吸商降低为0.85以下时，肝硬化、 肝癌的预后恶化。此外，还报道了随着肝硬化的严重程度的进展， 明显观察到了呼吸商的下降(以上，非专利文献1)。也就是说，通 过测定糖类与脂质的燃烧比例，能够判断肝硬化、肝癌等的严重程 度和预后。但是，认为计算呼吸商的现有方法缺乏实用性，不能简 易地客观获知营养状态。

另一方面，提出了将所谓的标记C-呼气试验(施予用¹³C标记 过的葡萄糖，测定以二氧化碳的形式排出至呼出气中的¹³CO₂)应用 在糖尿病的诊断中(参见专利文献2～4)。具体而言，专利文献2 中记载了如下方法：使用将特定位置的碳用¹³C取代的葡萄糖进行呼 气试验，测定排出至呼出气中的¹³CO₂浓度的增加率，由此来诊断有 无糖尿病及糖尿病的病型(I型糖尿病、II型糖尿病)。此外，专利 文献3及4中记载了下述内容：与专利文献2同样地使用经¹³C标记 过的葡萄糖进行呼气试验，可以以呼出气中的¹³C与¹²C之比 (¹³C/¹²C，其是根据排出至呼出气中的¹³CO₂浓度算出的)是比健康 受试者低的值为指标来诊断糖尿病患者、胰岛素抵抗患者。

但是，无论哪一文献中均未记载或暗示通过将使用葡萄糖的标 记C-呼气试验与使用脂肪酸的标记C-呼气试验组合，能够高精度地 检测糖类与脂质的燃烧比例来代替呼吸商。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平11-124343号公报

专利文献2：日本特开平10-67689号公报

专利文献3：日本特表2002-513911号公报

专利文献4：日本特开2008-292506号公报

非专利文献

非专利文献1：营养－评价与治疗，vol.29，No.1，37-40页

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过使用了被同位素标记过的碳原 子数为12～38的脂肪酸的标记C-呼气试验来高精度且快速地检测受 试者的胰岛素抵抗性的方法。此外，本发明的目的在于提供一种用 于测定胰岛素抵抗性的组合物，以用于上述方法。

此外，本发明的目的在于提供一种通过将使用了被同位素标记 过的葡萄糖的标记C-呼气试验的结果或血糖值与使用了被同位素标 记过的碳原子数为12～38的脂肪酸的标记C-呼气试验的结果组合来 高精度地检测受试者的糖/脂肪酸燃烧比及胰岛素抵抗性的方法。

为了解决上述课题，本申请的发明人反复进行了锐意研究，结 果发现：根据经口施予用同位素标记过的碳原子数为12～38的脂肪 酸后被排出至呼出气中的同位素标记二氧化碳(CO₂)的量、及由该 量算出的呼出气中含有的二氧化碳的存在比例(标记CO₂量相对于 未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例)，能够高精度且快速地测定 受试者的胰岛素抵抗性。此外，本申请的发明人发现，根据上述受 试者的结果，能够判定该受试者是否为胰岛素抵抗性、或是否为不 伴有胰岛素抵抗性的高胰岛素血症。

此外，本申请的发明人已确认到：通过将从使用经同位素标记 过的葡萄糖的呼气试验获得的结果或血糖值与从使用经同位素标记 过的碳原子数为12～38的脂肪酸的呼气试验获得的结果组合，能够 高精度地测定受试者的糖/脂肪酸燃烧比，并且，根据该糖/脂肪酸燃 烧比也能够高精度地测定受试者的胰岛素抵抗性。

本发明是基于上述发现而完成的，包括下述方案。

(1)测定胰岛素抵抗性的方法

(1-1)测定受试者的胰岛素抵抗性的方法，包括下述工序(a) 及(b)：

工序(a)，将组合物静脉内施予至受试者并采集呼出气，所述 组合物以经至少一个同位素C标记的碳原子数为12～38的脂肪酸或 其盐作为有效成分，所述脂肪酸或其盐在机体内被转化为标记二氧 化碳而被排出至呼出气中；以及

工序(b)，求出呼出气中含有的标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例。

需要说明的是，该工序(b)可以像下文所述那样通过求出例如 Δ％¹³C(¹³C浓度变化量：atom％)或Δ¹³C值(δ¹³C值变化量：‰) 来进行。

(1-2)如(1-1)所述的测定胰岛素抵抗性的方法，还包括下 述工序(c)：

工序(c)，将工序(b)中得到的受试者的“呼出气中含有的 标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(受试 者值)与从健康受试者得到的“呼出气中含有的标记CO₂量相对于 未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(对照值)进行比较，受 试者值高于对照值时，将该受试者确定为胰岛素敏感性下降(胰岛 素抵抗性)，受试者值等于或低于对照值时，将该受试者确定为胰 岛素敏感性正常或未下降。

(1-3)如(1-1)所述的测定胰岛素抵抗性的方法，其中，受 试者为高胰岛素血症患者，所述方法还包括下述工序(d)：

工序(d)，将工序(b)中得到的受试者的“呼出气中含有的 标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(受试 者值)与从健康受试者得到的“呼出气中含有的标记CO₂量相对于 未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(对照值)进行比较，受 试者值低于对照值时，将该受试者确定为胰岛素敏感性正常或未下 降的“非胰岛素抵抗性的高胰岛素血症”。

(1-4)如(1-1)所述的测定胰岛素抵抗性的方法，其中，受 试者为高胰岛素血症患者，所述方法还包括下述工序(e)：

工序(e)，将工序(b)中得到的受试者的“呼出气中含有的 标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(受试 者值)与从健康受试者得到的“呼出气中含有的标记CO₂量相对于 未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(对照值)进行比较，受 试者值高于对照值时，将该受试者确定为胰岛素敏感性下降，换言 之，确定为“胰岛素抵抗性”或“胰岛素抵抗性的高胰岛素血症”； 受试者值低于对照值时，将该受试者确定为胰岛素敏感性正常或未 下降，换言之，确定为“非胰岛素抵抗性的高胰岛素血症”。

(1-5)如(1-1)～(1-4)中任一项所述的测定胰岛素抵抗性 的方法，其中，上述同位素为¹³C。

(1-6)如(1-1)～(1-5)中任一项所述的测定胰岛素抵抗性 的方法，其中，碳原子数为12～38的脂肪酸是碳原子数为12～28的 中链、长链或极长链的脂肪酸。

(1-7)如(1-1)～(1-6)中任一项所述的测定胰岛素抵抗性 的方法，其中，碳原子数为12～38的脂肪酸是选自由月桂酸、肉豆 蔻酸、十五烷酸、硬脂酸、油酸及棕榈酸组成的组中的至少1种。

(1-8)如(1-1)～(1-7)中任一项所述的测定胰岛素抵抗性 的方法，其中，经至少一个同位素C标记的碳原子数为12～38的脂 肪酸是1位的碳被¹³C标记的1-¹³C-棕榈酸、1-¹³C-硬脂酸或1-¹³C- 油酸。

(1-9)如(1-1)～(1-8)中任一项所述的测定胰岛素抵抗性的方 法，其特征在于，针对处于非禁食状态的受试者实施工序(a)。

(1-10)如(1-1)～(1-9)中任一项所述的测定胰岛素抵抗性的 方法，所述方法是检测高胰岛素血症受试者有无胰岛素抵抗性的方 法。

(1-11)如(1-1)～(1-10)中任一项所述的测定胰岛素抵抗性的 方法，其中，受试者处于选自由临界性糖尿病、II型糖尿病、及肝 疾病(肝硬化、NASH、NAFLD)组成的组中的至少1种状态。

(2)糖/脂肪酸燃烧比的测定方法

(2-1)测定受试者体内的糖/脂肪酸燃烧比(combustionratio) 的方法，所述方法中，将针对受试者利用包括下述工序(i)及(ii) 的糖代谢能力测定方法得到的[Δ标记C(‰)－到呼出气采集时间t 为止的曲线下面积](以下称为“AUCt[标记C-葡萄糖]”)除以利用 上述(1-1)～(1-11)中任一项所述的测定胰岛素抵抗性的方法得到 的[Δ标记C(‰)－到呼出气采集时间t为止的曲线下面积](以下 称为“AUCt[标记C-脂肪酸]”)而得的值(AUCt[标记C-葡萄 糖]/AUCt[标记C-脂肪酸])作为指标，

工序(i)，将组合物静脉内施予至受试者并采集呼出气，所述 组合物以经至少一个同位素C标记的葡萄糖作为有效成分，所述葡 萄糖在机体内被转化为标记二氧化碳而被排出至呼出气中；以及

工序(ii)，求出呼出气中含有的标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例。

(2-2)测定受试者体内的糖/脂肪酸燃烧比的方法，所述方法 中，将受试者的血糖值的倒数(1/血糖值)除以利用上述(1-1)～ (1-11)中任一项所述的测定胰岛素抵抗性的方法得到的[Δ标记C (‰)－到呼出气采集时间t为止的曲线下面积](以下称为“AUCt[标 记C-脂肪酸]”)而得的值([1/血糖值]/AUCt[标记C-脂肪酸])作为 指标。

(2-3)测定受试者体内的糖/脂肪酸燃烧比的方法，所述方法 中，根据受试者的血糖值的倒数(1/血糖值)除以利用上述(1-1)～ (1-11)中任一项所述的测定胰岛素抵抗性的方法得到的Δ标记C (‰)的Ct[标记C-脂肪酸](t＝1-30min)而得的值([1/血糖值]/Ct[标 记C-脂肪酸](t＝1-30min))来测定受试者体内的糖/脂肪酸燃烧 比。

(2-4)如(2-1)～(2-3)中任一项所述的测定糖/脂肪酸燃烧 比的方法，其中，受试者处于禁食状态或处于非禁食状态。

(3)用于测定胰岛素抵抗性的组合物

(3-1)用于测定胰岛素抵抗性的具有注射施予形态的组合物， 所述组合物以经至少一个同位素C标记的碳原子数为12～38的脂肪 酸或其盐作为有效成分，所述脂肪酸或其盐在机体内被转化为标记 二氧化碳而被排出至呼出气中。

(3-2)如(3-1)所述的用于测定胰岛素抵抗性的组合物，其 中，上述同位素为¹³C。

(3-3)如(3-1)或(3-2)所述的用于测定胰岛素抵抗性的组 合物，其中，碳原子数为12～38的脂肪酸是碳原子数为12～18的饱 和脂肪酸或碳原子数为18的不饱和脂肪酸。

(3-4)如(3-1)～(3-3)中任一项所述的用于测定胰岛素抵 抗性的组合物，其中，碳原子数为12～38的脂肪酸是选自由月桂酸、 肉豆蔻酸、十五烷酸、硬脂酸、油酸及棕榈酸组成的组中的至少1 种，。

(3-5)如(3-1)～(3-4)中任一项所述的用于测定胰岛素抵 抗性的组合物，其中，经至少一个同位素C标记的碳原子数为12～38 的脂肪酸是1位的碳被¹³C标记的1-¹³C-棕榈酸、1-¹³C-硬脂酸或 1-¹³C-油酸。

(4)标记C-脂肪酸的应用

(4-1)以经至少一个同位素C标记的碳原子数为12～38的脂 肪酸作为有效成分的具有注射施予形态的组合物在用于测定胰岛素 抵抗性的呼气试验中的应用，所述脂肪酸在机体内被转化为标记二 氧化碳而被排出至呼出气中。

(4-2)如(4-1)所述的应用，其中，上述组合物为上述(3-1) ～(3-5)中任一项所述的用于测定胰岛素抵抗性的组合物。

(4-3)以经至少一个同位素C标记的碳原子数为12～38的脂 肪酸作为有效成分的具有注射施予形态的组合物在用于测定糖/脂肪 酸燃烧比的呼气试验中的应用，所述脂肪酸在机体内被转化为标记 二氧化碳而被排出至呼出气中。

(4-4)如(4-3)所述的应用，其中，上述组合物为上述(3-1) ～(3-5)中任一项所述的用于测定糖耐量的组合物。

根据本发明的方法，能够高精度且快速地测定评价受试者的胰 岛素抵抗性。通过在非禁食条件下实施本发明的方法，能够更进一 步提高精度及快速性。根据本发明的方法，能够在60分钟以内、优 选为30分钟以内、更优选为15分钟以内的短时间内测定评价受试 者对胰岛素的敏感性的下降(胰岛素抵抗性)。因此，根据本发明 的方法，不需要长时间约束受试者，能够不给受试者施加身体或精 神上的负担地测定受试者的胰岛素抵抗性。

此外，根据本发明的方法，能够测定高胰岛素血症的受试者有 无胰岛素抵抗性，能够辨别胰岛素抵抗性的高胰岛素血症及非胰岛 素抵抗性的高胰岛素血症。需要说明的是，非胰岛素抵抗性的高胰 岛素血症是胰岛素抵抗性(对胰岛素的敏感性下降)的前阶段，对 于被判定为非胰岛素抵抗性的高胰岛素血症的受试者而言，可通过 运动、饮食疗法来预防发展为胰岛素抵抗性。

此外，根据本发明，不仅能够测定临界性糖尿病、II型糖尿病 等高胰岛素血症的患者的胰岛素抵抗性，而且也能够测定肝疾病(肝 硬化、NASH[非酒精性脂肪肝炎]、NAFLD[非酒精性脂肪肝病]等) 患者的胰岛素抵抗性。

此外，通过将使用了用同位素标记过的碳原子数为12～38的脂 肪酸的呼气试验与使用经同位素标记过的葡萄糖的呼气试验并用， 能够测定受试者的糖/脂肪酸燃烧比。根据该方法，能够代替呼吸商 且比呼吸商更灵敏地测定受试者将糖类和脂肪酸中的哪一个用作能 量来源。此外，根据通过本发明的方法得到的“糖/脂肪酸燃烧比” 也能够高精度地评价受试者的胰岛素抵抗性。

附图说明

[图1]表示向禁食过的Zucker系大鼠经口施予(po)(―◇―) 或静脉注射(iv)(―■―)1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的 △¹³C(‰)的推移。纵轴表示呼出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施 予1-¹³C-棕榈酸钠后的各测定时间(t分钟)(实验例1)。

[图2]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty) 静脉注射U-¹³C-葡萄糖溶液后测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移。 (A)表示Lean大鼠(禁食：―◆―，非禁食：―◇―)的结果， (B)表示Fatty大鼠(禁食：―■―，非禁食：―□―)的结果。纵 轴表示呼出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予U-¹³C-葡萄糖溶液后 的呼出气采集时间(t分钟)(实验例2)。

[图3]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty) 静脉注射1-¹³C-乙酸钠溶液后测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移。 (A)表示Lean大鼠(禁食：―◆―，非禁食：―◇―)的结果， (B)表示Fatty大鼠(禁食：―■―，非禁食：―□―)的结果。纵 轴表示呼出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-乙酸钠溶液后 的呼出气采集时间(t分钟)(实验例2)。

[图4]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty) 静脉注射1-¹³C-辛酸钠溶液后测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移。 (A)表示Lean大鼠(禁食：―◆―，非禁食：―◇―)的结果， (B)表示Fatty大鼠(禁食：―■―，非禁食：―□―)的结果。纵 轴表示呼出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-辛酸钠溶液后 的呼出气采集时间(t分钟)(实验例2)。

[图5]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty) 静脉注射1-¹³C-月桂酸溶液后测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移。 (A)表示Lean大鼠(禁食：―◆―，非禁食：―◇―)的结果， (B)表示Fatty大鼠(禁食：―■―，非禁食：―□―)的结果。纵 轴表示呼出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-月桂酸溶液后 的呼出气采集时间(t分钟)(实验例2)。

[图6]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty) 静脉注射1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推 移。(A)表示Lean大鼠(禁食：―◆―，非禁食：―◇―)的结 果,(B)表示Fatty大鼠(禁食：―■―，非禁食：―□―)的结果。 纵轴表示呼出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-棕榈酸钠溶 液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例2)。

[图7]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty) 静脉注射1-¹³C-油酸溶液后测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移。 (A)表示Lean大鼠(禁食：―◆―，非禁食：―◇―)的结果， (B)表示Fatty大鼠(禁食：―■―，非禁食：―□―)的结果。纵 轴表示呼出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-油酸溶液后的 呼出气采集时间(t分钟)(实验例2)。

[图8]表示向LETO及OLETF系大鼠(禁食组、非禁食组)的 各组静脉施予1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的△¹³C(‰) 的推移。(A)表示LETO系大鼠(禁食：―◆―，非禁食：―◇―) 的结果，(B)表示OLETF系大鼠(禁食：―■―，非禁食：―□―) 的结果。纵轴表示呼出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-棕 榈酸钠溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例3)。

[图9](A)表示向禁食状态的ZDF系大鼠(Lean：―◆―，Fatty： ―■―)静脉注射1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的△¹³C(‰) 的推移。(B)表示向非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean：―◇―， Fatty：―□―)静脉注射1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的△ ¹³C(‰)的推移。(A)及(B)中，纵轴表示呼出气中的△¹³C(‰)， 横轴表示施予1-¹³C-棕榈酸钠溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实 验例3)。

[图10](A)表示向禁食状态的LETO大鼠(―◆―)及OLETF 大鼠(―■―)静脉注射1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的△ ¹³C(‰)的推移。(B)表示向禁食状态的LETO大鼠(―◇―) 及OLETF大鼠(―□―)静脉注射1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出 气中的△¹³C(‰)的推移。(A)及(B)中，纵轴表示呼出气中的 △¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-棕榈酸钠溶液后的呼出气采集时 间(t分钟)(实验例3)。

[图11](A)表示向非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean：―◇―， Fatty：―□―)静脉注射1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的△ ¹³C(‰)的推移。(B)表示向禁食状态的ZDF系大鼠(Lean：― ◆―，Fatty：―■―)静脉注射1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气 中的△¹³C(‰)的推移。(A)及(B)中，纵轴表示呼出气中的△ ¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-棕榈酸钠溶液后的呼出气采集时间 (t分钟)(实验例4)。

[图12](A)表示向非禁食状态的LETO大鼠(―◇―)及OLETF 大鼠(―□―)静脉注射1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的△ ¹³C(‰)的推移。(B)表示向禁食状态的LETO大鼠(―◆―) 及OLETF大鼠(―■―)静脉注射1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出 气中的△¹³C(‰)的推移。(A)及(B)中，纵轴表示呼出气中的 △¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-棕榈酸钠溶液后的呼出气采集时 间(t分钟)(实验例4)。

[图13]表示针对处于禁食状态及处于非禁食状态的ZDF系大鼠 (Lean：―◆―，Fatty：―□―)进行测定而得到的呼吸商(RQ) 的平均值±SD(实验例4)。

[图14]表示针对ZDF系大鼠(Lean及Fatty)、分别以禁食状态 下的值和非禁食状态下的值来比较实验例2中通过(a)U-¹³C葡萄 糖溶液施予(禁食状态、非禁食状态)得到的△¹³C(‰)AUC(120 分钟)与通过(f)1-¹³C棕榈酸钠溶液施予(禁食状态、非禁食状 态)得到的△¹³C(‰)AUC(60分钟)的比率(AUC[U-¹³C-葡萄 糖]/AUC[1-¹³C-棕榈酸钠])的结果。

[图15]表示针对ZDF系大鼠(Lean及Fatty)、分别以禁食状态 下的值和非禁食状态下的值来比较血糖值的倒数(禁食状态、非禁 食状态)与实验例2中通过(f)1-¹³C棕榈酸钠溶液施予(禁食状 态、非禁食状态)得到的△¹³C(‰)的AUC(60分钟)的比率([1/ 血糖值]/AUC[1-¹³C-棕榈酸钠])的结果。

[图16]表示针对ZDF系大鼠(Lean及Fatty)、分别以禁食状态 下的值和非禁食状态下的值来比较血糖值的倒数(禁食状态、非禁 食状态)与实验例2中通过(f)1-¹³C-棕榈酸钠溶液施予(禁食状 态、非禁食状态)得到的△¹³C(‰)的Cmax的比率([1/血糖 值]/Cmax[1-¹³C-棕榈酸钠])的结果。

[图17]自左侧起依次表示向对照组(非禁食时的血糖值：108 mg/dL)、轻度糖尿病组(非禁食时的血糖值：166mg/dL)及重度 糖尿病组(非禁食时的血糖值：281mg/dL)静脉内施予3-¹³C-葡萄 糖与1-¹³C-棕榈酸钠的混合溶液、从利用呼气试验测得的¹³CO₂浓度 算出的△¹³C(‰)的推移。

具体实施方式

(I)对与标记C-呼气试验相关的术语及分析方法的说明

本发明的胰岛素抵抗性及糖/脂肪酸燃烧比的测定方法以采用 ¹³C-呼气试验等标记C-呼气试验为基础。因此，在说明本发明之前， 对与标记C-呼气试验相关的术语及其分析方法进行说明。

需要说明的是，此处，作为本发明中使用的“同位素C”的一 个例子，示例¹³C进行说明。

(1)δ¹³C值(‰)

表示同位素的存在比例时，采用将同一元素中组成比例最高的 元素作为分母的同位素比(R)。因此，碳13(¹³C)的R值用以碳 12(¹²C)作为分母的下式表示。

R＝¹³C/¹²C……(式1)

由于R是非常小的数值，因此难以直接进行测定。为了更准确 地进行定量而使用质谱仪时，常与标准物质进行比较，测定结果用 下式定义的δ值表示。

δ¹³C＝([R_SAM/R_STD]－1)×1000……(式2)

δ¹³C：δ¹³C值(‰)

R_SAM：样品气中的¹³C存在比例

R_STD：标准气中的¹³C存在比例

需要说明的是，使用来自石灰石的二氧化碳(PDB)作为标准 气时，R_STD为R_PDB＝0.0112372。

(2)Δ¹³C值(‰)

如下式所示，“Δ¹³C值(‰)”是指将施予试剂前的δ¹³C值(即， 天然存在的¹³C的δ值)作为背景(background)从施予试剂后的δ¹³C 值中减去而得到的值(Δ¹³C)。

Δ¹³C(‰)＝(δ¹³C)_t－(δ¹³C)₀……(式3)

Δ¹³C(‰)：δ¹³C值变化量(‰)

(δ¹³C)_t：施予试剂后t小时处的δ¹³C值(‰)

(δ¹³C)₀：施予试剂前0小时处的δ¹³C值(‰)

(3)呼出气中的¹³C浓度(％¹³C：atom％)

呼出气中的¹³C浓度(％¹³C：atom％)用下式定义。

％¹³C＝[¹³C/(¹³C+¹²C)]×100

为了将(1)中定义的相对值δ¹³C值转换为总碳中的总碳中的¹³C 含量(％)(其为通常的浓度的概念)的形式，可以采用下述方法。

首先，将上式的右边的分母和分子除以¹²C，基于(式1)转换 为R，则成为下式。

％¹³C＝[R/(R+1)]×100……(式4)

将(式2)中求出的R_SAM代入该R中进行整理，则成为下式， 可以用δ¹³C值表示¹³C浓度(％¹³C)。

％¹³C＝{[(δ¹³C/1000)+1]×R_PDB×100}/{[[(δ¹³C/1000)+1]×R_PDB]+1}…(式5)

％¹³C：¹³C浓度(atom％)

δ¹³C：δ¹³C值(‰)

R_PDB：PDB标准气中的¹³C存在比例＝0.0112372

(4)¹³C浓度的变化量(Δ％¹³C)

如下式所定义地那样，呼出气中的¹³C浓度(％¹³C)的变化量 (Δ％¹³C)，可以通过将施予前0小时的¹³C浓度〔(％¹³C)₀〕从施予 t小时后的¹³C浓度〔(％¹³C)_t〕中减去而求出。

Δ％¹³C＝(％¹³C)_t－(％¹³C)₀……(式6)

Δ％¹³C：¹³C浓度变化量(atom％)

(％¹³C)_t：施予试剂t小时后的¹³C浓度(atom％)

(％¹³C)₀：施予试剂前0小时处的¹³C浓度(atom％)

(5)Δ¹³C值(‰)与¹³C浓度变化量(Δ％¹³C)的关系

¹³C的天然存在比例(R)为约0.011，即使在施予标记试剂的情 况下，呼出气中的增加量也仅为+0.001～0.002左右。因此，可以视 为天然存在比例R→0，用R表示％¹³C的(式4)可以用下式进行近 似。

％¹³C＝[R/(R+1)]×100≈R×100

使用上述近似式，首先利用作为δ¹³C的定义的(式2)求出R_SAM， 将其代入上式的R中进行整理，则可得到计算¹³C浓度的近似(式7)。

％¹³C＝[(δ¹³C/1000)+1]×R_PDB×100……(式7)

将其代入(式6)，则如下式(式8)所示，可以由Δ¹³C算出Δ％¹³C。

Δ％¹³C＝(％¹³C)_t－(％¹³C)₀

＝{[(δ¹³C)_t－(δ¹³C)₀]/1000}×R_PDB×100

＝(Δ¹³C×R_PDB)/10……(式8)

Δ％¹³C：¹³C浓度变化量(atom％)

Δ¹³C：δ¹³C值变化量(‰)

R_PDB：PDB标准气中的¹³C存在比例＝0.0112372

(II)用于测定胰岛素抵抗性的组合物

本发明的用于测定胰岛素抵抗性的组合物以经至少一个同位素 C标记的碳原子数为12～38的脂肪酸或其盐作为有效成分，所述脂 肪酸或其盐在机体内被转化为标记的CO₂气体而被排出至呼出气 中。可在本发明中使用的标记C-脂肪酸或其盐具有下述特性：施予 至受试者后，根据体内的脂质代谢能力而进行代谢，以含有标记C 的二氧化碳(其反映了脂质代谢能力的大小)的形式排出至呼出气 中。

作为可在本发明中使用的脂肪酸，如上所述可举出碳原子数为 12～38的脂肪酸。这些脂肪酸中包括碳原子数为12～小于18的中链 脂肪酸、碳原子数为18～小于24的长链脂肪酸、碳原子数为24～28 的极长链脂肪酸、碳原子数为30～38的超长链脂肪酸。优选为碳原 子数为12～28的中链、长链及极长链的脂肪酸，更优选为碳原子数 为12～小于24的中链及长链脂肪酸。具体而言，可举出月桂酸(C12)、 肉豆蔻酸(C14)、十五烷酸(C15)、棕榈酸(C16)、硬脂酸(C18) 及花生酸等饱和脂肪酸；棕榈油酸(C16)、油酸(C18)、异油酸 (C18)及神经酸(C24)等具有一个双键的不饱和脂肪酸；亚油酸 (C18)、8,11-二十碳二烯酸(8,11-icosadienoicacid)等具有两个双 键的不饱和脂肪酸；亚麻酸(C18)、花生四烯酸(C20)等具有三 个以上双键的不饱和脂肪酸。优选为饱和脂肪酸及具有一个双键的 不饱和脂肪酸，其中优选为月桂酸(C12:0)、硬脂酸(C18:0)、 棕榈酸(C16:0)及油酸(C18:1)，更优选为硬脂酸(C18)及棕榈 酸(C16)。

作为可用于标记构成脂肪酸的碳原子的同位素，没有特别限定， 具体可举出¹³C及¹⁴C。上述同位素无论为放射性及非放射性均可， 但从安全性的观点考虑优选为非放射性同位素。作为上述同位素， 可合适地举出¹³C。

同位素元素－标记脂肪酸是以下述方式标记而成的：经由脂质 代谢途径(脂肪酸代谢途径)生成的CO₂中的至少一部分被同位素 标记。例如，作为如上所述的同位素元素－标记脂肪酸，可举出脂 肪酸的1位的碳原子被同位素标记而形成的化合物，具体可举出 1-¹³C标记脂肪酸。此外，也可以是脂肪酸的至少1位的碳原子被同 位素标记而形成的的化合物，即，可以是除1位的碳原子以外、其 他碳原子中的任意1个以上或全部碳原子被同位素标记而形成的化 合物。用¹³C、¹⁴C等同位素标记脂肪酸等化合物的方法没有特别限 定，可广泛采用通常所使用的方法(佐佐木，“5.1稳定同位素在临 床诊断中的应用”：化学领域107“稳定同位素在医·药学、生物学 中的应用”，pp.149-163(1975)，南江堂；梶原，RADIOISOTOPES， 41，45-48(1992)等)。这些同位素标记化合物、尤其是实施例中 示出的1-¹³C标记-月桂酸、1-¹³C标记-棕榈酸、1-¹³C标记-硬脂酸、 1-¹³C标记-油酸及它们的盐均可以以商业方式获得，简便起见也可以 使用相关的市售品。

需要说明的是，作为碳原子数为12～38的脂肪酸的盐，只要为 可向生物体施予的、所谓的药学上允许的盐即可，具体可举出钠、 钾等的碱金属盐、镁、钙等的碱土类金属盐，但优选为碱金属盐， 特别优选为钠盐。

关于本发明的组合物，只要基本上满足下述条件即可，并不特 别限定其形态、标记C-脂肪酸以外的成分、各成分的配合比例、组 合物的制备方法等，所述条件为：在施予后，标记C-脂肪酸被吸收 至体内，再在被代谢后，以标记二氧化碳的形式排出至呼出气中。

如下文所述的实验例1所示，从“Δ¹³C(‰)”的上升速度(换 言之，施予¹³C标记脂肪酸后，以¹³CO₂的形式被排出至呼出气中的 速度)考虑，优选具有注射施予形态、尤其是静脉内施予形态。此 处，注射施予形态包括注射剂、滴注剂的施予形态(液态、悬浮态 或乳液态)。

本发明的组合物可以实质上仅包含作为有效成分的上述标记C- 脂肪酸，但只要无损于本发明的作用及效果，则也可以是根据各制 剂形态(施予形态)配合有本领域中通常使用的药学上允许的任意 载体和添加剂作为其他成分的形态。在该情况下，作为有效成分而 配合的标记C-脂肪酸的量没有特别限定，可举出在100重量％的组 合物中为例如1～99重量％的范围，可以在上述范围内适宜调整。

具体而言，在将本发明的组合物制备成液体、悬浮液或乳状液 等注射施予形态时，除了可以使用纯化水或注射用蒸馏水以外，还 可以根据各种形态使用各种载体或添加剂。例如，作为添加剂，可 使用等渗剂(例如氯化钠等)、pH调节剂(例如盐酸、氢氧化钠等)、 缓冲剂(例如硼酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等)、防腐剂(例如 苯扎氯铵等)、增稠剂(例如羧基乙烯基聚合物等)之类通常使用 的添加剂。需要说明的是，本发明的组合物只要在使用时具有上述 注射施予形态即可，也可以具有在使用时用注射用蒸馏水等溶解从 而进行使用的形态，例如经冷冻干燥或喷雾干燥而成的制剂等固体 形态。

本发明的组合物可用作下文所述的测定方法中向受试者施予的 样品(被测样品)。具体而言，可用作为了测定受试者的胰岛素抵 抗性而施予的被测样品，还可用作为了测定受试者的糖/脂肪酸燃烧 比而施予的被测样品。

上述测定方法均可如下进行测定：将本发明的组合物静脉内施 予至受试者(包括人和动物)后，采集呼出气，测定呼出气中含有 的二氧化碳的存在比例(标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于 CO₂总量的比例)，由此以该存在比例为指标进行测定。其详细内容 在下述(III)中进行说明。

作为在本发明的用于测定胰岛素抵抗性的组合物中配合的标记 C-脂肪酸(有效成分)的量，可根据情况适宜地进行调节设定。具 体而言，可以以每1次的施予量换算成标记C-脂肪酸(有效成分) 的量为5mg/个体～50g/个体、优选为10mg/个体～25g/个体的范围的 方式进行制备。

(III)测定胰岛素抵抗性的方法

通过使用上文所述的本发明的用于测定胰岛素抵抗性的组合 物，能够测定受试者(人或人以外的哺乳动物)对胰岛素的敏感性 下降(胰岛素抵抗性)。

如下所述，该胰岛素抵抗性的测定基本上可经由下述工序进行： 将以标记C-脂肪酸为有效成分的上述组合物施予至以人为代表的哺 乳动物(受试者)，采集呼出气[下述本发明方法的工序(a)]；测 定该呼出气中含有的二氧化碳的存在比例(标记CO₂量相对于未标 记CO₂量或相对于CO₂总量的比例)[下述本发明方法的工序(b)]。

[(a)工序]将以经至少一个同位素C标记的碳原子数为12～38 的脂肪酸或其盐(以下，只要没有特别说明，则将它们统称为“标 记C-脂肪酸”。)为有效成分的组合物施予至受试者并采集呼出气， 所述脂肪酸或其盐在机体内被转化为标记二氧化碳而被排出至呼出 气中。

[(b)工序]求出呼出气中含有的标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例。

如上文所述，本发明中使用的标记C-脂肪酸具有下述特性：静 脉内施予至受试者后，根据受试者的脂质代谢能力而进行代谢，以 含有标记C的二氧化碳(其反映了该脂质代谢能力的大小)的形式 排出至呼出气中。

需要说明的是，此处，如实验例1所示，从精度高低的观点考 虑，以标记C-脂肪酸为有效成分的本发明组合物的施予方法优选为 静脉内施予。

作为配合在本发明的用于测定胰岛素抵抗性的组合物中的标记 C-脂肪酸(有效成分)的量，可根据情况〔受试者的区分、受试者 的状态(禁食/非禁食的区分)等〕适宜地进行调节设定。作为每1 次静脉内施予的量，可以以换算成标记C-脂肪酸(有效成分)的量 为5mg/个体～50g/个体、优选为10mg/个体～25g/个体的范围的方式 进行制备。

如上文所述，本发明中作为对象的受试者为人或人以外的哺乳 动物。作为人以外的哺乳动物，可举出小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、 猫、猴、猪、牛及马等，但优选为小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猴 等实验动物。

在实施(a)工序之前，上述受试者可以为禁食状态，也可以为 非禁食状态。如下文所述的实验例2所示，与处于禁食状态的受试 者相比，通过针对处于非禁食状态的受试者实施工序(a)，能够在 工序(b)中于短时间内高精度地测定“标记CO₂量相对于未标记 CO₂量或相对于CO₂总量的比例”，因此非禁食状态是优选的。

作为使用工序(a)中采集的呼出气、根据工序(b)中求出的 呼出气中含有的二氧化碳的存在比例(标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例)测定受试者的胰岛素抵抗性的方法的 一个例子，以使用将¹³C-标记脂肪酸作为有效成分的组合物的情况 (即，测定的标记CO₂为¹³CO₂的情况)为例进行说明，如下所述。

(1)按照下文中记载的方法，以减去了施予¹³C-标记脂肪酸 之前的¹³C含量(atom％)〔(％¹³C)₀〕而得的¹³C浓度的变化量 (Δ％¹³C)的形式算出采集的呼出气中含有的二氧化碳的存在比例 (¹³CO₂量相对于CO₂总量的比例)。

求出呼出气中含有的总碳中的¹³C含量(atom％)〔呼出气中的 ¹³C浓度(％¹³C)〕，进而按照式6减去施予¹³C-标记化合物之前的 ¹³C浓度(atom％)〔(％¹³C)₀〕，求出¹³C浓度的变化量(Δ％¹³C)。

¹³C浓度(atom％)＝[¹³C/(¹³C+¹²C)]×100

Δ％¹³C＝(％¹³C)_t－(％¹³C)₀……(式6)

Δ％¹³C：¹³C浓度变化量(atom％)

(％¹³C)_t：施予试剂t小时后的¹³C浓度(atom％)

(％¹³C)₀：施予试剂前0小时处的¹³C浓度(atom％)

(2)需要说明的是，根据需要，可基于式5及式3将上述¹³C 浓度的变化量(Δ％¹³C)换算为Δ¹³C值(‰)〔δ¹³C值变化量(‰) 或DOB(‰)〕。

％¹³C＝{[(δ¹³C/1000)+1]×R_PDB×100}/{[[(δ¹³C/1000)+1]×R_PDB]+1}……(式5)

％¹³C：¹³C浓度(atom％)

δ¹³C：δ¹³C值(‰)

R_PDB：PDB标准气中的¹³C存在比例＝0.0112372

Δ¹³C(‰)＝(δ¹³C)_t－(δ¹³C)₀……(式3)

Δ¹³C：δ¹³C值变化量(‰)

(δ¹³C)_t：施予试剂后t小时处的δ¹³C值(‰)

(δ¹³C)₀：施予试剂前0小时处的δ¹³C值(‰)

如下文所述的实验例所示，施予以标记C-脂肪酸为有效成分的 用于测定胰岛素抵抗性的组合物后被排出至呼出气中的标记C含 量、或者与之相对应的Δ％¹³C(atom％)或Δ¹³C值(‰)，反映出 受试者的胰岛素抵抗性，根据使用该组合物的本发明的方法，能够 精度良好且快速地测定该受试者的胰岛素抵抗性。

需要说明的是，对呼出气样品中中含有的标记二氧化碳的测定 ·分析根据使用的同位素为放射性还是非放射性而不同，但通常可 采用液体闪烁计数法(liquidscintillationcountermethod)、质谱法 (massspectrometry)、红外分光光度法(infraredspectroscopy)、 发射光谱法(emissionspectrometry)、磁共振波谱法(magnetic resonancespectrummethod)等常规使用的分析手法进行。从测定精 度的观点考虑优选红外分光光度法及质谱法。

可以将上述工序(b)中得到的“呼出气中含有的标记CO₂量相 对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(Δ％¹³C(atom％)或 Δ¹³C值(‰))作为指标，利用下述方法确定受试者的胰岛素抵抗 性。

(c-1)将工序(b)中得到的受试者的“呼出气中含有的标记 CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(Δ％¹³C (atom％)或Δ¹³C值(‰))(受试者值)与从健康受试者得到的 相应的“呼出气中含有的标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于 CO₂总量的比例”(Δ％¹³C(atom％)或Δ¹³C值(‰))(对照值) 进行比较。

(c-2)通过上述进行比较的结果，当受试者值高于对照值时， 将该受试者确定为对胰岛素的敏感性下降，即，“有胰岛素抵抗性”； 将受试者值等于或低于对照值的情况确定为受试者对胰岛素的敏感 性正常或未下降。

需要说明的是，此处所谓健康受试者，是指就对胰岛素的敏感 性而言为健康(正常)的受试者。也就是说，该健康受试者为胰岛 素分泌方面没有异常、且没有产生糖尿病(包括II型、妊娠糖尿病)、 临界性糖尿病及肝疾病(肝硬化、NASH、NAFLD等)等糖代谢异 常(包括高胰岛素血症)的受试者。

对于是否为健康受试者，可采用本领域中已知或常用的糖尿病 诊断方法(75g葡萄糖负荷试验等血糖值的测定、胰岛素抵抗性试 验、血红蛋白A1c等)进行确定。例如，75g葡萄糖负荷试验的情 况下，若空腹时的血糖值低于110mg/dl且负荷后第2小时的血糖值 低于140mg/dl，则能够判断糖代谢能力正常。

如实验例2(图2)所示，与健康模型(相当于图2中的ZDFlean 大鼠)相比，已出现糖尿病病症或处于糖尿病的前期状态的受试模 型(胰岛素抵抗性的模型)(相当于图2中的ZDFfatty大鼠)的糖 代谢能力下降。若向该受试模型施予标记C-脂肪酸并实施工序(b)， 则由图6的(B)图(关于ZDFfatty的图)可知，与从健康模型得 到的“呼出气中含有的标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(Δ％¹³C(atom％)或Δ¹³C值(‰))(对照值)(图 6的(A)图(关于ZDFlean的图))相比，通过该工序(b)求出 的“呼出气中含有的标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(Δ％¹³C(atom％)或Δ¹³C值(‰))(受试者值) 在禁食状态(fasting)及非禁食状态(feeding)下均普遍上升(亢进) (实验例2)。从作为受试动物使用了作为胰岛素抵抗性模型的 OLETF大鼠(其是出现伴有肥胖或/及脂肪肝的糖尿病和糖尿病并发 症病症的2型糖尿病的模型动物)来代替上述ZDFfatty大鼠的实验 也获得了同样的结果(实验例3，参见图7)。此外，胰岛素抵抗性 模型的Δ％¹³C(atom％)或Δ¹³C值(‰)相对于健康模型的上升差 (亢进差)，在非禁食状态(feeding)下更为显著(实验例3，图8 (A)与(B)的比较、及图9(A)与(B)的比较)。也就是说， 由上述结果可知，与健康受试者相比，已出现糖尿病病症或处于糖 尿病的前期状态且胰岛素敏感性有所下降的受试者(胰岛素抵抗性 的受试者)的脂肪酸代谢亢进。因此，根据本发明的方法，能够根 据受试者的脂肪酸代谢能力来间接地测定该受试者的胰岛素抵抗 性。由非禁食状态下的实验结果即图8及9中的各(B)图可知，上 述本发明的方法的特征为：从胰岛素敏感性下降的受试者得到的值 (Δ％¹³C(atom％)或Δ¹³C值(‰))与从健康受试者得到的对照 值的差异明确，可在采集呼出气后的短时间(1分钟～30分钟以内、 优选为1分钟～15分钟以内)内获得高精度的结果。

此外，如实验例4(图10及11)所示，与健康模型(图10：ZDF lean大鼠，图11：LETO大鼠)相比，“非胰岛素抵抗性/高胰岛素 血症”(虽为高胰岛素血症但对胰岛素的敏感性没有下降)的受试 模型(图10：ZDFfatty大鼠，图11：OLETF大鼠)的脂肪酸代谢 能力下降。若在优选为非禁食的状态下对该“非胰岛素抵抗性/高胰 岛素血症”模型施予标记C-脂肪酸并实施工序(b)，则由图10及 11中的各(A)图(图10：ZDFfatty大鼠的曲线图，图11：OLETF 大鼠的曲线图)可知，与从健康模型(图10：ZDFlean大鼠，图11： LETO大鼠)得到的“呼出气中含有的标记CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(Δ％¹³C(atom％)或Δ¹³C值(‰)) (对照值)相比，通过该工序(b)求出的“呼出气中含有的标记 CO₂量相对于未标记CO₂量或相对于CO₂总量的比例”(Δ％¹³C (atom％)或Δ¹³C值(‰))(受试者值)有所下降(减小)(实 验例4)。由上述结果可知，与健康受试者相比，不伴有胰岛素抵抗 性的高胰岛素血症(非胰岛素抵抗性/高胰岛素血症)的受试者的脂 肪酸代谢下降。也就是说，根据本发明的方法，能够根据高胰岛素 血症受试者的脂肪酸代谢能力间接地测定该受试者有无胰岛素抵抗 性，能够辨别“非胰岛素抵抗性/高胰岛素血症”及“胰岛素抵抗性/ 高胰岛素血症”。根据表示实验例4的结果的图10～11、尤其是表示 非禁食状态下的实验结果的各(A)图可知，该方法的特征也在于能 够在采集呼出气后的短时间(1分钟～30分钟以内、优选为1分钟～15 分钟以内)内获得高精度的结果。

需要说明的是，也可以以与利用呼气试验的本发明的方法同时 实施的方式进行本领域中已知或常用的糖代谢能力的测定(血糖值 的测定、胰岛素抵抗性试验、血红蛋白A1c等)。通过并用糖代谢 能力的测定，能够进一步判断、确定已通过本发明的方法被确定为 胰岛素抵抗性的受试者是否为伴有胰岛素抵抗性的临界性糖尿病或 糖尿病(II型糖尿病、妊娠糖尿病)。此外，也可以以与利用呼气 试验的本发明的方法同时实施的方式进行本领域中已知或常用的肝 疾病·肝功能的测定。通过并用肝疾病·肝功能的测定，能够进一 步判断、确定已通过本发明的方法被确定为胰岛素抵抗性的受试者 是否为伴有胰岛素抵抗性的肝疾病(肝硬化、NASH、NAFLD)。

在该情况下，作为适用本发明的方法的受试者，可举出已罹患 或可能罹患上述疾病(伴有胰岛素抵抗性的临界性糖尿病或糖尿病、 肝疾病、肝功能障碍)的人或其他哺乳类。此外，本发明的方法可 以出于检测有无胰岛素抵抗性的目的、或同时检测上述疾病的罹患 及有无胰岛素抵抗性的目的而广泛适用于人或其他哺乳类。由于本 发明的方法的精度高，因此能够有效地用于辨别、判定受试者的下 述状态：虽然为正常并且既非糖尿病亦非临界性糖尿病、但胰岛素 敏感性下降的状态；虽然为正常并且胰岛素敏感性没有下降、但为 高胰岛素血症的状态。

需要说明的是，根据作为其他指标的测定值(血糖值)，当空 腹时的血糖值为100mg/dl～低于126mg/dl、优选为110mg/dl～低于 126mg/dl，或口服葡萄糖负荷试验(75gOGTT)的2小时值为140 mg/dl～199mg/dl时，可确定为“临界性糖尿病”。此外，当符合下 述任一条件时，可确定为“糖尿病”，所述条件为：(1)空腹时的 血糖值为126mg/dl以上，(2)口服葡萄糖负荷试验(75gOGTT) 的2小时值为200mg/dl以上，(3)随机血糖值为200mg/dl以上， 或(4)血红蛋白A1c为6.5％以上。

(IV)糖/脂肪酸燃烧比的测定方法

机体内的糖及脂质的代谢燃烧比率通常可根据呼吸商进行评 价，所述呼吸商是从排出至呼出气中的二氧化碳量和氧量基于下式 算出的。

呼吸商＝每单位时间的二氧化碳排出量/每单位时间的摄氧量

具体而言，摄取糖类时的呼吸商为RQ＝1.0，摄取脂质时的呼 吸商为RQ＝0.7，根据通过上式得到的呼吸商的值，能够确定糖及 脂质中的哪一个在机体内以多大的比例被利用(燃烧比)。

本发明的糖/脂肪酸燃烧比的测定方法(糖/脂肪酸燃烧比测定 法)是用于测定机体内的糖与脂肪酸的燃烧比(糖/脂肪酸燃烧比) 的方法，能够代替作为现有方法的上述呼吸商，并且能够以比呼吸 商更高的精度求出受试者的期望的糖/脂肪酸燃烧比，在这方面是一 种有用的方法。

本发明的糖/脂肪酸燃烧比测定法可大体分为下述3个方法。

(1)根据针对受试者通过施予标记C-葡萄糖后的呼气试验得 到的△标记C(‰)的AUC(t)、及通过施予标记C-脂肪酸后的呼 气试验得到的△标记C(‰)的AUC(t)(t是指从施予标记C-脂 肪酸开始到采集呼出气为止的时间、即呼出气采集时间。下同。)， 求出两者的比率(AUC_t[标记C-葡萄糖]/AUC_t[标记C-脂肪酸])的方 法。

(2)根据从受试者得到的血糖值的倒数(1/血糖值)及通过施 予标记C-脂肪酸后的呼气试验得到的△标记C(‰)的AUC(t)， 求出两者的比率([1/血糖值]/AUC_t[标记C-脂肪酸])的方法。

(3)根据从受试者得到的血糖值的倒数(1/血糖值)及通过施 予标记C-脂肪酸后的呼气试验得到的△标记C(‰)的最大值(Ct) (t＝1～30min)，求出两者的比率([1/血糖值]/Cmax[标记C-脂肪 酸])的方法。

以下，对上述3个方法进行说明。

(1)计算“AUC_t[标记C-葡萄糖]/AUC_t[标记C-脂肪酸]”的方法

(1-1)AUC_t[标记C-脂肪酸]的计算方法

该方法中，AUC_t[标记C-脂肪酸]是指通过上述本发明的基于标 记C-脂肪酸施予的呼气试验求出的[Δ标记C(‰)－到呼出气采集 时间t为止的曲线下面积](AUC_t)。

该“△标记C(‰)－到呼出气采集时间t为止的曲线下面积” (AUC_t)可由表示通过本发明的基于标记C-脂肪酸施予的呼气试验 得到的△标记C(‰)的经时变化的曲线图求出。具体而言，可如 下求出：从以通过本发明的基于标记C-脂肪酸施予的呼气试验得到 的Δ¹³C(‰)为纵轴、以施予标记C-脂肪酸后的经过时间(呼出气 采集时间：t)(分钟)为横轴的曲线图，算出其曲线下面积(AUC_t)。

标记C-脂肪酸、标记C-脂肪酸的施予形态及施予方法、及△标 记C(‰)的计算方法等如(III)中所述，其记载可在此引用。

需要说明的是，此处，作为呼出气采集时间(t)，可以为标记 C-脂肪酸施予后1分钟到60分钟之间的任何时间，可在该范围内选 择任意时间。优选为标记C-脂肪酸施予后1～30分钟，更优选为1～15 分钟。

(1-2)AUC_t[标记C-葡萄糖]的计算方法

此外，该方法中，AUC_t[标记C-葡萄糖]是指通过基于标记C-葡 萄糖施予的呼气试验求出的[Δ标记C(‰)－到呼出气采集时间t 为止的曲线下面积](AUC_t)。该“△标记C(‰)－到呼出气采集 时间t为止的曲线下面积”(AUC_t)可由表示上述本发明的呼气试 验中通过向受试者施予标记C-葡萄糖来代替标记C-脂肪酸而得到的 △标记C(‰)的经时变化的曲线图求出。具体而言，可如下求出： 从以通过基于标记C-葡萄糖施予的呼气试验得到的Δ¹³C(‰)为纵 轴、以施予标记C-葡萄糖后的经过时间(呼出气采集时间：t)(分 钟)为横轴的曲线图，算出其曲线下面积。

需要说明的是，此处，作为呼出气采集时间(t)，可以为标记 C-葡萄糖施予后1分钟到120分钟之间的任何时间，可在该范围内 选择任意时间。优选为标记C-葡萄糖施予后1～60分钟，更优选为 1～30分钟。其中，在计算“AUC_t[标记C-葡萄糖]/AUC_t[标记C-脂肪 酸]”时，可以使用与AUC_t[标记C-脂肪酸]的计算中所采用的呼出气 采集时间(t)相同的时间(t)。

标记C-葡萄糖为将在机体内被转化为标记的CO₂气体而被排出 至呼出气中的、经至少一个同位素C标记的葡萄糖即可。该标记C- 葡萄糖具有下述特性：施予至受试者后，根据体内的糖代谢能力而 进行糖代谢，以含有标记C的二氧化碳(其反映了糖代谢能力的大 小)的形式排出至呼出气中。作为可用于标记构成葡萄糖的碳原子 的同位素，没有特别限定，具体可举出¹³C及¹⁴C。上述同位素无论 为放射性及非放射性均可，但从安全性的观点考虑优选为非放射性 同位素。作为上述同位素，可合适地举出¹³C。

同位素元素－标记葡萄糖是以下述方式标记而成的：经由糖代 谢途径生成的CO₂中的至少一部分被同位素标记。例如，作为如上 所述的葡萄糖，可举出葡萄糖的1位或6位、2位或5位、以及3 位或4位中任一方的至少1个碳原子被同位素标记而形成的化合物， 具体可举出1-¹³C标记葡萄糖、2-¹³C标记葡萄糖、3-¹³C标记葡萄糖。 此外，也可以是葡萄糖的1位、2位、3位、4位、5位及6位的全 部碳原子被同位素标记而形成的物质。优选为3位、4位的碳原子被 同位素标记而形成的葡萄糖(例如，3-¹³C标记葡萄糖、4-¹³C标记葡 萄糖)，以及1位、2位、3位、4位、5位及6位的全部碳原子被 同位素标记而形成的葡萄糖。

用¹³C、¹⁴C等同位素标记葡萄糖等化合物的方法没有特别限定， 可广泛采用通常所使用的方法。这些同位素标记化合物、尤其是实 施例2中示出的¹³C标记-葡萄糖均可以以商业方式获得，简便起见 也可以使用相关的市售品。

进行呼气试验时，可以向受试者施予包含标记C-葡萄糖的组合 物作为被测样品。该组合物只要基本上满足下述条件即可，并不特 别限定其形态、标记C-葡萄糖以外的成分、各成分的配合比例、组 合物的制备方法等，所述条件为：在施予后，标记C-葡萄糖被吸收 至体内，再在被代谢后，以标记二氧化碳的形式排出至呼出气中。 例如作为形态，可以具有经口施予形态，也可以具有静脉内施予形 态。在前者的情况下，可采用下述任意经口施予形态：液体制剂(包 括糖浆剂)、悬浮剂及乳剂等液体形态；片剂(包括未包衣剂、包 衣剂)、咀嚼片剂、胶囊剂、丸剂、散剂(粉末剂)、细粒剂及颗 粒剂等固体形态等。在后者的情况下，可采用例如注射剂、滴注剂 的施予形态(液态、悬浮态或乳液态)。从为非侵害性测定方法的 观点考虑优选为经口施予形态，但从能获得高的测定精度的观点考 虑优选为静脉内施予形态。在该情况下，在制备成例如滴注剂或注 射剂等液体、悬浮液或乳状液的形态时，除了可以使用纯化水或注 射用蒸馏水以外，还可以根据各种形态使用各种载体或添加剂。例 如，作为添加剂，可使用等渗剂(例如氯化钠等)、pH调节剂(例 如盐酸、氢氧化钠等)、缓冲剂(例如硼酸、磷酸氢二钠、磷酸二 氢钠等)、防腐剂(例如苯扎氯铵等)、增稠剂(例如羧基乙烯基 聚合物等)那样的通常使用的添加剂。

此外，该组合物并不限定于具有制剂形态，只要含有上述标记 C-葡萄糖且无损于本发明的作用效果即可，可以将上述标记C-葡萄 糖与任意食品素材组合，制成固体食品、流体食品或液态食品的形 态。本发明的组合物可以实质上仅包含作为有效成分的上述标记C- 葡萄糖，但只要无损于本发明的作用及效果，则也可以是根据各制 剂形态(施予形态)配合有本领域中通常使用的药学上允许的任意 载体和添加剂作为其他成分的形态。在该情况下，作为有效成分而 配合的标记C-葡萄糖的量没有特别限定，可举出在100重量％的组 合物中为1～95重量％，可以在上述范围内适宜调整。

作为标记C-葡萄糖的施予量，可根据情况适宜地进行调节设定， 作为每1次的施予量，可举出5mg/个体～50g/个体、优选为10mg/ 个体～25g/个体的范围。

(1-3)“AUC_t[标记C-葡萄糖]/AUC_t[标记C-脂肪酸]”

根据上文中求出的AUC_t[标记C-葡萄糖]与AUC_t[标记C-脂肪酸] 之比(AUC_t[标记C-葡萄糖]/AUC_t[标记C-脂肪酸])，能够测定受试 者的糖/脂肪酸的燃烧比。

例如，将从受试者得到的“AUC_t[标记C-葡萄糖]/AUC_t[标记C- 脂肪酸]”与从糖代谢能力及脂质代谢能力(脂肪酸代谢能力)正常 的健康受试者得到的“AUC_t[标记C-葡萄糖]/AUC_t[标记C-脂肪酸]” 进行比较时，在受试者的“AUC_t[标记C-葡萄糖]/AUC_t[标记C-脂肪 酸]”低的情况下，可以判断受试者的糖代谢能力下降或脂质代谢能 力(脂肪酸代谢能力)亢进。

对此，基于下文所述的实验例5的图13的结果进行说明。

实验例5的图13有关通过上述方法求出的AUC_t[标记C-葡萄糖] 与AUC_t[标记C-脂肪酸]之比(AUC_t[标记C-葡萄糖]/AUC_t[标记C- 脂肪酸])，是表示分别在禁食状态和非禁食状态下对呈现出糖代谢 异常(胰岛素抵抗性)的糖尿病的模型动物(ZDFfatty大鼠)的该 比与糖代谢能力(对胰岛素的敏感性)正常的健康受试者的模型动 物(ZDFlean大鼠)的该比进行比较的结果的图。

如图13所示，在禁食状态及非禁食状态中的任一状态下，糖尿 病模型(ZDFfatty大鼠)的“AUC_t[标记C-葡萄糖]/AUC_t[标记C-脂 肪酸]”均较之健康模型(ZDFlean大鼠)显著低，可在两者中观察 到明显的差异。由此可知，与健康模型相比，糖尿病模型的糖代谢 能力(对胰岛素的敏感性)下降，或脂质代谢能力(脂肪酸代谢能 力)亢进以代偿糖代谢能力的下降。

(2)计算“[1/血糖值]/AUC_t[标记C-脂肪酸]”的方法

(2-1)AUC_t[标记C-脂肪酸]的计算方法

该AUC_t[标记C-脂肪酸]的计算方法如上文所述，可将上述记载 引用于此。

(2-2)[1/血糖值]的计算方法

受试者的血糖值可按照常规方法计算。具体而言，可通过使用 葡萄糖脱氢酶(GDH)的酶电极法装置(LifeCheckSensor:Gunze Limited)进行测定。

可以从由此得到的血糖值的倒数求出[1/血糖值]。

(2-3)“[1/血糖值]/AUC_t[标记C-脂肪酸]”

根据上文中求出的[1/血糖值]与AUC_t[标记C-脂肪酸]之比([1/ 血糖值]/AUC_t[标记C-脂肪酸])，能够测定受试者的糖/脂肪酸的燃 烧比。

例如，将从受试者得到的“[1/血糖值]/AUC_t[标记C-脂肪酸]” 与从糖代谢能力(对胰岛素的敏感性)及脂质代谢能力(脂肪酸代 谢能力)正常的健康受试者得到的“[1/血糖值]/AUC_t[标记C-脂肪酸]” 进行比较时，在受试者的“[1/血糖值]/AUC_t[标记C-脂肪酸]”低的 情况下，可以判断受试者的糖代谢能力(对胰岛素的敏感性)下降 或脂质代谢能力(脂肪酸代谢能力)亢进。

对此，基于下文所述的实验例5的图14的结果进行说明。

实验例5的图14有关通过上述方法求出的[1/血糖值]与AUC_t[标 记C-脂肪酸]之比([1/血糖值]/AUC_t[标记C-脂肪酸])，是表示分别 在禁食状态和非禁食状态下对呈现出糖代谢异常(胰岛素抵抗性) 的糖尿病的模型动物(ZDFfatty大鼠)的该比与糖代谢能力(对胰 岛素的敏感性)正常的健康受试者的模型动物(ZDFlean大鼠)的 该比进行比较的结果。

如图13所示，在禁食状态及非禁食状态中的任一状态下，糖尿 病模型(ZDFfatty大鼠)的“[1/血糖值]/AUC_t[标记C-脂肪酸]”均 较之健康模型(ZDFlean大鼠)显著低，可在两者中观察到明显的 差异。由此可知，与健康模型相比，糖尿病模型的糖代谢能力(对 胰岛素的敏感性)下降，或脂质代谢能力(脂肪酸代谢能力)亢进 以代偿糖代谢能力的下降。

(3)计算“[1/血糖值]/Ct[标记C-脂肪酸](t＝1-30min)”的方法

(3-1)[1/血糖值]的计算方法

该[1/血糖值]的计算方法如上文所述，可将上述记载引用于此。

(3-2)Ct[标记C-脂肪酸](t＝1-30min)的计算方法

该方法中，Ct[标记C-脂肪酸](t＝1-30min)是指通过上述本发 明的基于标记C-脂肪酸施予的呼气试验而求出的、在标记C-脂肪酸 施予后1～30分钟的范围内的任意呼出气采集时间(t)处的△标记C (‰)的值(Ct)。该呼出气采集时间(t)只要为标记C-脂肪酸施 予后1～30分钟的范围内的至少1点即可，没有特别限制，但是优选 为标记C-脂肪酸施予后1～15分钟的范围内、更优选为1～10分钟的 范围内任意的至少1点。该Ct[标记C-脂肪酸](t＝1-30min)中包 含△标记C(‰)的最大值(Cmax)。

该Ct[标记C-脂肪酸](t＝1-30min)可如下求出：由在本发明 的基于标记C-脂肪酸施予的呼气试验中在标记C-脂肪酸施予后 1～30分钟以内、优选为1～15分钟以内、更优选为1～10分钟以内采 集的呼出气，算出△标记C(‰)。

此外，在作为Ct[标记C-脂肪酸](t＝1-30min)的一种实施方 式求出△标记C(‰)的最大值(Cmax)的情况下，可采用表示通 过本发明的基于标记C-脂肪酸施予的呼气试验得到的△标记C(‰) 的经时变化的曲线图。具体而言，在以通过本发明的基于标记C-脂 肪酸施予的呼气试验得到的Δ¹³C(‰)为纵轴、以施予标记C-脂肪 酸后的经过时间(呼出气采集时间：t，其中t＝1-30)(分钟)为横 轴的曲线图中，将Δ¹³C(‰)峰的最大值作为Cmax[标记C-脂肪酸]。

标记C-脂肪酸、标记C-脂肪酸的施予形态及施予方法及△标记 C(‰)的计算方法等如(III)中所述，其记载可在此引用。

(3-3)“[1/血糖值]/Ct[标记C-脂肪酸](t＝1-30min)”

根据上文中求出的[1/血糖值]与Ct[标记C-脂肪酸](t＝1-30 min)之比([1/血糖值]/Ct[标记C-脂肪酸](t＝1-30min))，能够 测定受试者的糖/脂肪酸的燃烧比。

例如，将从受试者得到的“[1/血糖值]/Ct[标记C-脂肪酸](t＝1-30 min)”与从糖代谢能力(对胰岛素的敏感性)及脂质代谢能力(脂 肪酸代谢能力)正常的健康受试者得到的“[1/血糖值]/Ct[标记C-脂 肪酸](t＝1-30min)”进行比较时，在受试者的“[1/血糖值]/Ct[标 记C-脂肪酸](t＝1-30min)”低的情况下，可以判断受试者的糖代 谢能力(对胰岛素的敏感性)下降或脂质代谢能力(脂肪酸代谢能 力)亢进。

实施例

以下给出实施例及实验例，以更进一步阐明本发明。但是，本 发明并不受这些实施例等的任何限制。

实验例1

(1)1-¹³C-棕榈酸钠溶液的制备

于约80℃将1-¹³C-棕榈酸钠以浓度成为500μmol/mL的方式溶 解在含水乙醇中，将其加入已预先加热至37℃的20％BSA中，搅 拌混合进行溶解从而使得1-¹³C-棕榈酸钠的浓度成为20μmol/2mL， 制成1-¹³C-棕榈酸钠溶液(在以下实验例中也相同。)

(2)实验方法

使用大鼠(雄性，Zucker系大鼠)作为受试动物。将自试验前 一天起实施禁食的该大鼠分为经口施予组及静脉施予组两组(各组 n＝3)，以2mL/kg的比例分别经口施予及静脉内施予(1)中制备的 1-¹³C-棕榈酸钠溶液(20μmol/2mL)。在施予前(0分钟)和到施 予后180分钟为止的各时间点(t分钟)采集呼出气，使用呼出气分 析用质谱仪(ABCA：SerCon公司制)由排出至呼出气中的¹³CO₂浓度求出△¹³C(‰)。

需要说明的是，△¹³C(‰)如下进行计算：分别测定1-¹³C-棕 榈酸钠施予前(0分钟)和施予后的各呼出气采集时间点(t分钟) 的呼出气中的¹³CO₂/¹²CO₂浓度比(δ¹³C值)，由各采集时间点(t) 的δ¹³C值(δ¹³Ct)与施予前的δ¹³C值(δ¹³C₀)之差(δ¹³Ct－δ¹³C₀) 算出△¹³C(‰)值(在以下实验例中也相同。)

(3)实验结果

经口施予(po)或静脉内施予(iv)1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得 的呼出气中的△¹³C(‰)的推移示于图1。图中，纵轴表示呼出气 中的△¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-棕榈酸钠后的呼出气采集时 间(t分钟)。

如图1所示，在经口施予组(―◇―)中，△¹³C(‰)的测定 值在各测定时间之间没有变化，但是在静脉内施予组(-■―)中， 在比较早的时间(施予后10分钟以内)观察到了△¹³C(‰)的峰。

从该结果可知，1-¹³C-棕榈酸钠以¹³CO₂的形式被排出至呼出气 中。此外，从该结果可知，通过静脉内施予(而非经口施予)1-¹³C- 棕榈酸钠溶液，能够判定禁食时的脂肪燃烧。

实验例2使用各种¹³C标记化合物的胰岛素抵抗性评价

(1)含有各种¹³C标记化合物的溶液的制备

(a)U-¹³C-葡萄糖溶液

将U-¹³C-葡萄糖以浓度成为50μmol/mL的方式溶解在生理盐水 中，将该溶液作为U-¹³C-葡萄糖溶液。

(b)1-¹³C-乙酸钠溶液

将1-¹³C-乙酸钠以浓度成为50μmol/mL的方式溶解在生理盐水 中，将该溶液作为1-¹³C-乙酸钠溶液。

(c)1-¹³C-辛酸钠溶液

将1-¹³C-辛酸钠以浓度成为50μmol/mL的方式溶解在生理盐水 中，将该溶液作为1-¹³C-辛酸钠溶液。

(d)1-¹³C-月桂酸溶液

于约80℃将1-¹³C-月桂酸溶解在含水乙醇中，使其浓度成为500 μmol/mL。将其加入已预先加热至37℃的20％BSA中，进行搅拌溶 解从而使得1-¹³C-月桂酸的浓度成为20μmol/2ml，将该溶液作为 1-¹³C-月桂酸溶液。

(e)1-¹³C-棕榈酸钠溶液

通过与实验例1相同的方法，将1-¹³C-棕榈酸钠以浓度成为20 μmol/2ml的方式溶解在含水乙醇中，将该溶液作为1-¹³C-棕榈酸钠 溶液。

(f)1-¹³C-油酸溶液

将0.5g油酸、0.5g大豆油、0.12g精制蛋黄卵磷脂加入塑料管 中，溶解后，一边以每次0.5mL的量添加甘油溶液(24.7mg/mL) 一边进行乳化。达到约9mL后，使用1.2μm过滤器进行过滤，加 水定容至10mL。

测定该溶液中的油酸含量，用甘油溶液(22mg/mL)进行稀释， 制成5.65mg/mL(20μmol/mL)的溶液。

(2)胰岛素抵抗性的评价

(2-1)实验方法

作为受试动物，使用下文中说明的(A)及(B)。

(A)ZDF系大鼠[雄性，Lean(18周龄，禁食时的血糖值和 胰岛素值分别为73mg/dL和1.0ng/mL，非禁食时的血糖值和胰岛素 值分别为98mg/dL和3.9ng/mL)及Fatty(18周龄，禁食时的血糖 值和胰岛素值分别为369mg/dL和1.7ng/mL，非禁食时的血糖值和 胰岛素值分别为474mg/dL和13.6ng/mL)]。

(B)ZDF系大鼠[雄性，Lean(13周龄，禁食时的血糖值和胰 岛素值分别为63.8mg/dL和0.21ng/mL，非禁食时的血糖值和胰岛 素值分别为111.5mg/dL和2.26ng/mL)及Fatty(13周龄，禁食时 的血糖值和胰岛素值分别为240.3mg/dL和1.97ng/mL，非禁食时的 血糖值和胰岛素值分别为595.8mg/dL和2.77ng/mL)]。

ZDFFatty大鼠是出现接近成年人的II型糖尿病及其并发症的病 态症状的、对胰岛素的敏感性下降的胰岛素抵抗性模型动物。另一 方面，ZDFLean大鼠是血糖值及对胰岛素的敏感性正常的健康模型 动物。将(A)的Lean及Fatty大鼠各自分为禁食组(自前一天起实 施禁食)和非禁食组，将各组进一步分为5组，向各组分别静脉内 施予上文中制备的(a)U-¹³C-葡萄糖溶液、(b)1-¹³C-乙酸钠溶液、 (c)1-¹³C-辛酸钠溶液、(f)1-13C-油酸溶液(以上，各自每次1 ml/kg)、(d)1-¹³C-月桂酸溶液、或(e)1-¹³C-棕榈酸钠溶液(以 上，各自每次2ml/kg)，对于(a)～(e)，使用(A)的大鼠采集 呼出气；对于(f)，使用(B)的大鼠采集呼出气(各组n＝3)。

在(a)～(f)的溶液施予前(0分钟)和到施予后60分钟为止 的各时间点(t分钟)采集呼出气，使用呼出气分析用质谱仪(ABCA： SerCon公司制)由排出至呼出气中的¹³CO₂浓度求出△¹³C(‰)。

(2-2)实验结果

(2-2-1)U-¹³C-葡萄糖溶液的施予

向ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉内施予U-¹³C-葡萄糖溶液后 测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移示于图2。图2(A)示出Lean 大鼠的结果，图2(B)示出Fatty大鼠的结果。图中，纵轴表示呼 出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予U-¹³C-葡萄糖溶液后的呼出气 采集时间(t分钟)。

由图2的结果可知，由于Lean大鼠为健康模型，所以在非禁食 时利用饵食中的糖类作为能量来源。因此，△¹³C(‰)的值较之禁 食时增高。另一方面，由于Fatty大鼠为胰岛素抵抗性模型，遗传性 地无法利用糖类，因此不论是禁食状态还是非禁食状态，两者的△¹³C (‰)的推移大体相同，几乎没有差异。

(2-2-2)1-¹³C-乙酸钠溶液的施予

向ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉内施予1-¹³C-乙酸钠溶液后 测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移示于图3。图3(A)示出Lean 大鼠的结果，图3(B)示出Fatty大鼠的结果。图中，纵轴表示呼 出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予U-¹³C-乙酸钠溶液后的呼出气 采集时间(t分钟)。由图3可知，Lean大鼠的结果和Fatty大鼠的 结果几乎没有差异，各组的△¹³C(‰)显示出了同样的推移。

(2-2-3)1-¹³C-辛酸钠溶液的施予

向ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉内施予1-¹³C-辛酸钠溶液后 测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移示于图4。图4(A)示出Lean 大鼠的结果，图4(B)示出Fatty大鼠的结果。图中，纵轴表示呼 出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予U-¹³C-辛酸钠溶液后的呼出气 采集时间(t分钟)。由图4可知，Lean大鼠的结果和Fatty大鼠的 结果几乎没有差异，各组的△¹³C(‰)显示出了同样的推移。

(2-2-4)1-¹³C-月桂酸溶液的施予

向ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉内施予1-¹³C-月桂酸溶液后 测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移示于图5。图中，纵轴表示呼 出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-月桂酸溶液后的呼出气 采集时间(t分钟)。(A)示出Lean大鼠的结果，(B)示出Fatty 大鼠的结果。由图5可知，就静脉内施予1-¹³C-月桂酸后的△¹³C(‰) 的推移、尤其是静脉内施予后10分钟内的推移而言，在健康模型 (Lean)中，在禁食组和非禁食组之间观察到了差异；但在胰岛素 抵抗性模型(Fatty)中，在禁食组和非禁食组之间没有观察到差异。 对比健康模型(Lean)和胰岛素抵抗性模型(Fatty)时，观察到了 尤其是非禁食组的△¹³C(‰)的推移、尤其是静脉内施予后15分钟 内的推移存在差异，观察到了胰岛素抵抗性模型(Fatty)的△¹³C(‰) 比健康模型(Lean)的△¹³C(‰)更高的倾向。

(2-2-5)1-¹³C-棕榈酸钠溶液

向ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉施予1-¹³C-棕榈酸钠溶液后 测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移示于图6。图6(A)示出Lean 大鼠的结果，图6(B)示出Fatty大鼠的结果。图中，纵轴表示呼 出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-棕榈酸钠溶液后的呼出 气采集时间(t分钟)。

(2-2-6)1-¹³C-油酸溶液的施予

向ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉内施予1-¹³C-油酸溶液后测 得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移示于图7。图7(A)示出Lean 大鼠的结果，图7(B)示出Fatty大鼠的结果。图中，纵轴表示呼 出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-油酸溶液后的呼出气采 集时间(t分钟)。

由图6可知，就静脉内施予1-¹³C-棕榈酸钠后的△¹³C(‰)的 推移而言，在健康模型(Lean)及胰岛素抵抗性模型(Fatty)中均 观察到：禁食(空腹)状态下的△¹³C(‰)的值比非禁食状态下高， 非禁食状态和禁食状态之间在体内的能量利用方面存在差异。对比 健康模型(Lean)和胰岛素抵抗性模型(Fatty)时，观察到了尤其 是非禁食组的△¹³C(‰)的推移、尤其是静脉内施予后15分钟内的 推移存在差异，观察到了胰岛素抵抗性模型(Fatty)的△¹³C(‰) 比健康模型(Lean)的△¹³C(‰)更高的倾向。

此外，由图7可知，就静脉内施予1-¹³C-油酸后的△¹³C(‰) 的推移而言，在健康模型(Lean)及胰岛素抵抗性模型(Fatty)中 均观察到：禁食(空腹)状态下的△¹³C(‰)的值比非禁食状态下 高，非禁食状态和禁食状态之间在体内的能量利用方面存在差异。 对比健康模型(Lean)和胰岛素抵抗性模型(Fatty)时，观察到了 尤其是非禁食组的△¹³C(‰)的推移、尤其是静脉内施予后30分钟 内的推移存在差异，观察到了胰岛素抵抗性模型(Fatty)的△¹³C(‰) 比健康模型(Lean)的△¹³C(‰)更高的倾向。

此外，与(2-2-1)的施予U-¹³C-葡萄糖溶液时相比，禁食时与 非禁食时的能量利用的差异更明确，能够更精密地监测能量来源的 转换。从该结果可知，通过在禁食及非禁食状态下(优选为非禁食 状态下)静脉内施予1-¹³C-棕榈酸或其盐或者1-¹³C-油酸或其盐并进 行呼气试验，能够判定有无胰岛素抵抗性。

实验例3使用1-¹³C-棕榈酸钠溶液的胰岛素抵抗性评价

(1)实验方法

作为受试动物，使用LETO大鼠(雄性)(25周龄，禁食时的 血糖值和胰岛素值：80mg/dL和1.4ng/mL，非禁食时的血糖值和胰 岛素值：105mg/dL和3.2ng/mL)及OLETF大鼠(雄性)(25周龄， 禁食时的血糖值和胰岛素值：101mg/dL和1.1ng/mL，非禁食时的 血糖值和胰岛素值：198mg/dL和14.4ng/mL)。需要说明的是， OLETF大鼠是伴有肥胖或/及脂肪肝的2型糖尿病的模型动物，LETO 大鼠是其对照(健康模型)。禁食时，OLETF大鼠为正常血糖，但 在非禁食时，为高胰岛素血症及高血糖，显示出了隐性糖尿病的状 态。上述结果表明，OLETF大鼠是对胰岛素的敏感性下降的高胰岛 素血症大鼠，可以认为其是胰岛素抵抗性的模型动物。

将上述各大鼠分为禁食组(自前一天起实施禁食)和非禁食组， 向各组静脉内施予上述实验例2中制备的1-¹³C-棕榈酸钠溶液(2 ml/kg)(各组n＝3)。在1-¹³C-棕榈酸钠溶液施予前(0分钟)和到 施予后60分钟为止的各时间点(t分钟)采集呼出气，使用呼出气 分析用质谱仪(ABCA：SerCon公司制)由排出至呼出气中的¹³CO₂浓度求出△¹³C(‰)。

(2)实验结果

向作为健康模型的LETO大鼠及作为胰岛素抵抗性模型的 OLETF大鼠(分别分为禁食组及非禁食组)的各组静脉内施予1-¹³C- 棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的△¹³C(‰)的推移示于图8。(A) 示出LETO大鼠的结果，(B)示出OLETF大鼠的结果。图中，纵 轴表示呼出气中的△¹³C(‰)，横轴表示施予1-¹³C-棕榈酸钠溶液 后的呼出气采集时间(t分钟)。

由图8可知，就静脉内施予1-¹³C-棕榈酸钠后的△¹³C(‰)的 推移而言，与实验例2(2)(2-2-5)的结果同样地，在LETO及 OLETF系大鼠中均观察到：禁食(空腹)状态下的△¹³C(‰)的数 值比非禁食状态下高，非禁食状态和禁食状态之间在体内的能量利 用方面存在差异。此外，对比健康模型(LETO)和伴有肝疾病的胰 岛素抵抗性模型(OLETF)时，在禁食组及非禁食组中的任一组中， 均观察到了△¹³C(‰)的推移、尤其是静脉内施予后15分钟内的推 移存在差异，观察到了伴有肝疾病的胰岛素抵抗性模型(OLETF) 的△¹³C(‰)比健康模型(LETO)的△¹³C(‰)更高的倾向。

根据上述结果确认到：通过使用1-¹³C-棕榈酸的呼气试验，不仅 对已出现糖尿病病症的胰岛素抵抗性模型、即使是对伴有肝疾病的 隐性糖尿病的模型，也能够灵敏地监测胰岛素抵抗性。

在禁食状态及非禁食状态下对ZDF系大鼠(雄性，Lean及Fatty) 静脉施予1-¹³C-棕榈酸钠后的△¹³C(‰)的推移分别示于图9(A) 及(B)，在禁食状态及非禁食状态下对LETO大鼠(其为健康模型) 及OLETF系大鼠(其为伴有肝疾病的胰岛素抵抗性模型)静脉施予 1-¹³C-棕榈酸钠后的△¹³C(‰)的推移分别示于图10(A)及(B)。 如图9(A)及图10(A)所示，可知即使在禁食时，也能够判定健 康模型和伴有肝疾病的胰岛素抵抗性模型的糖代谢能力(对胰岛素 的敏感性)的差异；但如图9(B)、图10(B)所示，可知通过在 非禁食时进行测定，能够基于更大的差别来判定两者的差异。

实验例4不伴有胰岛素抵抗性的高胰岛素血症(非胰岛素抵抗性－高胰岛素血症)的评价

(1)实验方法

作为处于胰岛素抵抗性(对胰岛素的敏感性的下降)发生的前 阶段的动物，使用OLETF大鼠(11周龄，禁食时的血糖值和胰岛素 值：104mg/dL和0.6ng/mL，非禁食时的血糖值和胰岛素值：124 mg/dL和2.7ng/mL)及ZDFFatty大鼠(11周龄，禁食时的血糖值 和胰岛素值：91mg/dL和3.4ng/mL，非禁食时的血糖值和胰岛素值： 116mg/dL和19.0ng/mL)。此外，作为它们的对照(健康模型)， 使用LETO大鼠(11周龄，禁食时的血糖值和胰岛素值：57mg/dL 和0.3ng/mL，非禁食时的血糖值和胰岛素值：98mg/dL和1.4ng/mL) 及ZDFLean大鼠(11周龄，禁食时的血糖值和胰岛素值：72mg/dL 和0.3ng/mL，非禁食时的血糖值和胰岛素值：113mg/dL和1.7 ng/mL)。处于胰岛素抵抗性发生的前阶段的动物(OLETF大鼠、 ZDFFatty大鼠)虽然患有高胰岛素血症，但血糖值在正常范围内。 因此，将其称为不伴有胰岛素抵抗性的高胰岛素血症模型，简称为 “非胰岛素抵抗性/高胰岛素血症模型”。

将上述大鼠分为禁食组(自前一天起实施禁食)和非禁食组， 向各组静脉内施予上述实验例2中制备的1-¹³C-棕榈酸钠溶液(2 ml/kg)(各组n＝3)。在1-¹³C-棕榈酸钠溶液施予前(0分钟)和到 施予后30分钟为止的各时间点(t分钟)采集呼出气，使用呼出气 分析用质谱仪(ABCA:SerCon公司制)由排出至呼出气中的¹³CO₂浓度求出△¹³C(‰)。

(2)实验结果

向ZDF系大鼠(雄性，Lean及Fatty)(非禁食组、禁食组) 的各组静脉内施予1-¹³C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的△¹³C (‰)的推移示于图11。图11(A)示出非禁食组的结果，11(B) 示出禁食组的结果。图中，纵轴表示呼出气中的△¹³C(‰)，横轴 表示施予1-¹³C-棕榈酸钠溶液后的呼出气采集时间(t分钟)。

在非禁食状态及禁食状态下对LETO及OLETF大鼠静脉施予 1-¹³C-棕榈酸钠溶液后的△¹³C(‰)的推移分别示于图12。图12(A) 示出非禁食组的结果，12(B)示出禁食组的结果。

如图11(B)及图12(B)所示，就胰岛素抵抗性发生的前阶段 中禁食时的△¹³C(‰)的推移而言，在健康模型与非胰岛素抵抗性/ 高胰岛素血症模型之间几乎没有观察到差异。但是，如图11(A) 及图12(A)所示，确认到了非禁食时的非胰岛素抵抗性/高胰岛素 血症模型的△¹³C(‰)值显著低于健康模型的△¹³C(‰)值。该模 式与实验例2中示出的已出现糖尿病病症的胰岛素抵抗性模型的模 式、实验例3中示出的伴有肝疾病的隐性糖尿病的胰岛素抵抗性模 型的模式(施予1-¹³C-棕榈酸钠溶液后的△¹³C(‰)的推移显著高 于健康模型的△¹³C(‰)的模式)(图7～10)相反。根据该结果确 认到：与胰岛素抵抗性的患者相反地，非胰岛素抵抗性/高胰岛素血 症的患者的脂肪酸代谢下降。从该结果可知，通过将有无脂肪酸代 谢的亢进及下降作为指标，能够辨别高胰岛素血症患者有无胰岛素 抵抗性。具体而言，对于高胰岛素血症患者，当在使用标记C-脂肪 酸的呼气试验中较之健康受试者而言脂肪酸的代谢亢进时，能够确 定对胰岛素的敏感性下降(有胰岛素抵抗性。胰岛素抵抗性/高胰岛 素血症)，反之，当较之健康受试者而言脂肪酸的代谢下降时，能 够确定对胰岛素的敏感性没有下降(无胰岛素抵抗性。非胰岛素抵 抗性/高胰岛素血症)。

实验例5呼吸商的评价

作为受试动物，将大鼠(雄性，ZDF系大鼠，Lean及Fatty)分 别分为2组(禁食组及经口施予组)。对于禁食组，从实验的前一 天起实施禁食；对于经口施予组，在转移至呼出气分析用腔室 (chamber)内后40分钟后，以4mL/kg的比例经口施予已溶解在水 中的葡萄糖(2g/4mL)(n＝1)。

使用生物气体分析用质谱仪(“ARCO-2000”：ArcoSystemInc. 制)，由各组的排出至呼出气中的二氧化碳量和氧气量基于下式算 出呼吸商。

呼吸商(RQ)＝每单位时间的二氧化碳排出量/每单位时间的摄氧量

此处，糖类的呼吸商为RQ＝1.0，脂质的呼吸商为RQ＝0.7。因此， 可以根据通过上式得到的呼吸商的值来测定糖及脂质中的哪一个以 多大的比例被利用。

针对ZDF系大鼠(Lean及Fatty)进行测定而得到的呼吸商的 平均值±SD示于图13。

从该结果可知，健康模型(Lean)在非禁食时利用糖类作为能 量来源，而已出现糖尿病病症的胰岛素抵抗性模型(Fatty)则没有 利用糖类。此外，可知在禁食时两组之间几乎没有差异。

实验例6糖/脂肪酸燃烧比

使用实验例2中进行的(a)U-¹³C-葡萄糖溶液施予的结果和(e) 1-¹³C-棕榈酸钠溶液施予的结果，计算糖/脂肪酸燃烧比。

(1)糖类/脂肪酸燃烧比(A)

针对ZDF系大鼠(Lean及Fatty)，分别以禁食状态下的值和 非禁食状态下的值来比较实验例2中通过(a)U-¹³C-葡萄糖溶液施 予(禁食状态、非禁食状态)得到的△¹³C(‰)的AUC(120分钟) 与通过(e)1-¹³C-棕榈酸钠溶液施予(禁食状态、非禁食状态)得 到的△¹³C(‰)的AUC(60分钟)的比率(AUC[¹³-C-葡萄 糖]/AUC[1-¹³C-棕榈酸钠])，结果示于图14。该比率(AUC[¹³C-葡 萄糖]/AUC[1-¹³C-棕榈酸钠])表示糖/脂肪酸燃烧比。

需要说明的是，由于U-¹³C-葡萄糖有6个碳，所以使用了乘以 1/6的AUC120分钟值。由于1-¹³C-棕榈酸钠的施予量为20μmol/kg， 所以使用了乘以2.5的AUC60分钟值，以与U-¹³C-葡萄糖的施予量 50μmol/kg一致。

如图14所示，就呼吸商(RQ)而言，禁食时的健康模型(Lean) 与已出现糖尿病病症的胰岛素抵抗性模型(Fatty)之间的差异不明 确，由此可知，不能准确地判定在禁食时受试者将糖类和脂肪酸中 的哪一个用作能量来源。与此相对，如图14所示，根据从使用标记 C-葡萄糖的呼气试验和使用标记C-脂肪酸的呼气试验的结果算出的 “AUC[U-¹³C-葡萄糖]/AUC[1-¹³C-脂肪酸]”，在禁食时及非禁食时， 健康模型(Lean)与已出现糖尿病病症的胰岛素抵抗性模型(Fatty) 之间的差异均明确，由此可知，不论在禁食及非禁食中的哪一种状 态下，均能准确地测定受试者将糖类和脂肪酸中的哪一个用作能量 来源。也就是说，根据上述方法，能够作为呼吸商的替代且能够比 呼吸商更灵敏地测定糖类和脂肪酸中的哪一个被用作能量来源。

此外，由图14可知，与健康模型(Lean)相比，已出现糖尿病 病症的胰岛素抵抗性模型(Fatty)的禁食时与非禁食时的 “AUC[U-¹³C-葡萄糖]/AUC[1-¹³C-脂肪酸]”的差异极小。因此，通 过测定受试者的禁食时与非禁食时的“AUC[U-¹³C-葡萄 糖]/AUC[1-¹³C-脂肪酸]”的差异，能够以更高的精度测定受试者对胰 岛素敏感性的下降(胰岛素抵抗性)。

(2)糖类/脂肪酸燃烧比(B)

针对ZDF系大鼠(Lean及Fatty)，分别以禁食状态下的值和 非禁食状态下的值来比较血糖值的倒数(禁食状态、非禁食状态) 与实验例2中通过(e)1-¹³C-棕榈酸钠溶液施予(禁食状态、非禁 食状态)得到的△¹³C(‰)的AUC(60分钟)的比率([1/血糖 值]/AUC[1-¹³C-棕榈酸钠])，结果示于图15。该比率([1/血糖 值]/AUC[1-¹³C-棕榈酸钠])表示糖/脂肪酸燃烧比。

与图14同样地，可知不论在禁食时还是在非禁食时，均能够判 定健康模型(Lean)、已出现糖尿病病症的胰岛素抵抗性模型(Fatty) 中利用了糖类、脂肪酸中的哪一个来作为能量来源。由此可知，仅 通过进行利用1-¹³C-棕榈酸钠的测定即可代替呼吸商，并且比呼吸商 更灵敏。

此外，由图15可知，与健康模型(Lean)相比，已出现糖尿病 病症的胰岛素抵抗性模型(Fatty)的禁食时与非禁食时的“[1/血糖 值]/AUC[1-¹³C-脂肪酸]”的差异极小。因此，通过测定受试者的禁食 时与非禁食时的“[1/血糖值]/AUC[1-¹³C-脂肪酸]”的差异，能够以 更高的精度测定受试者的胰岛素抵抗性糖耐量。

(3)糖类/脂肪酸燃烧比(C)

针对ZDF系大鼠(Lean及Fatty)，分别以禁食状态下的值和 非禁食状态下的值来比较血糖值的倒数(禁食状态、非禁食状态) 与实验例2中通过(e)1-¹³C-棕榈酸钠溶液施予(禁食状态、非禁 食状态)得到的△¹³C(‰)的Ct的比率([1/血糖值]/Ct[1-¹³C-棕榈 酸钠])，结果示于图15。需要说明的是，此处，作为呼出气采集时 间(t)，采用△¹³C(‰)的值显示出最大值的时间。具体而言，对 于处于禁食状态及处于非禁食状态的健康模型(Lean)，分别采用 了t＝2分钟及5分钟；此外，对于处于禁食状态及处于非禁食状态 的糖尿病模型(Fatty)，分别采用了t＝2分钟及5分钟。

该比率([1/血糖值]/Ct)表示糖/脂肪酸燃烧比。

由图16可知，与图14和图15同样地，不论在禁食时还是在非 禁食时，均能够判定健康模型(Lean)、糖尿病模型(Fatty)中利 用了糖类、脂肪酸中的哪一个来作为能量来源。由此可知，本发明 中，为了实施利用1-¹³C-棕榈酸钠的测定，仅通过以在1-¹³C-棕榈酸 钠施予后1分钟到30分钟的范围内的1个时间点进行测定的方式进 行，由此即可代替呼吸商，并且比呼吸商更灵敏。

此外，由图16可知，与健康模型(Lean)相比，糖尿病模型(Fatty) 的禁食时与非禁食时的“[1/血糖值]/Ct[1-¹³C-脂肪酸](t＝1-30min)” 的差异极小。因此，通过测定受试者的禁食时与非禁食时的“[1/血 糖值]/Cmax[1-¹³C-脂肪酸](t＝1-30min)”的差异，能够以更高的 精度测定受试者对胰岛素敏感性的下降(胰岛素抵抗性)。

实验例7

(1)3-¹³C-葡萄糖+1-¹³C-棕榈酸钠混合液的制备

于约80℃将1-¹³C-棕榈酸钠以浓度成为500μmol/mL的方式溶 解在含水乙醇中，将其加入已预先加热至37℃的20％BSA中并进 行搅拌。进一步加入3-¹³C-葡萄糖溶液，制备3-¹³C-葡萄糖(50μmol/2 mL)和1-¹³C-棕榈酸钠(20μmol/2mL)的混合溶液(以下将其称为 “葡萄糖/棕榈酸混合液”)。

(2)实验方法

使用大鼠(LETO、OLETF，均为雄性)作为受试动物。OLETF 大鼠是伴有肥胖及脂肪肝的糖尿病模型、即胰岛素抵抗性模型， LETO大鼠是其对照(健康模型)。分别分成对照组(非禁食时的血 糖值：108mg/dL)、轻度糖尿病组(非禁食时的血糖值：166mg/dL)、 及重度糖尿病组(非禁食时的血糖值：281mg/dL)，在非禁食状态 下以2ml/kg的用量向上述各组静脉内施予(1)中制备的葡萄糖/棕 榈酸混合液(n＝1)。

然后，在静脉施予葡萄糖/棕榈酸混合液之前(0分钟)及施予 后的各时间点(t分钟)采集呼出气，使用呼出气分析用质谱仪 (ABCA：SerCon公司制)由排出至呼出气中的¹³CO₂浓度求出△¹³C (‰)。

(3)实验结果

结果示于图17。图17中，自左侧起依次表示分别向对照组(非 禁食时的血糖值：108mg/dL)、轻度糖尿病组(非禁食时的血糖值： 166mg/dL)、及重度糖尿病组(非禁食时的血糖值：281mg/dL)静 脉内施予葡萄糖/棕榈酸混合液、从利用呼气试验测得的¹³CO₂浓度 算出的△¹³C(‰)的推移。需要说明的是，各图中，纵轴表示呼出 气中的△¹³C(‰)，横轴表示静脉内施予后的呼出气采集时间(t 分钟)。

图17所示的实测值与模拟结果(未示出)非常一致，由此可知 能够根据实测值的△¹³C(‰)的推移来监测糖尿病的发展程度(对 照→轻度糖尿病→重度糖尿病)、换言之亦即对胰岛素的敏感性的 下降(胰岛素抵抗性的增高)。此外，通过模型分析(药物动态)， 还能够将施予葡萄糖/棕榈酸混合液而得到的实测值分解成葡萄糖和 棕榈酸各自的呼出气反应。