UGT1A1基因Q239X突变型过表达慢病毒载体的构建及病毒包装

摘要

目的 构建尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)基因Q239X突变型过表达慢病毒载体并进行慢病毒包装.方法 设计合成UGT1A1基因Q239X突变型片段,将纯化的UGT1A1基因Q239X突变型片段与线性化的慢病毒表达载体GV358 DNA进行连接反应,构建GV358-UGT1A1(p.Q239X)慢病毒表达载体.利用PCR及DNA测序鉴定GV358-UGT1A1(p.Q239X)阳性克隆;将构建成功的GV358-UGT1A1(p.Q239X)慢病毒表达载体和辅助包装质粒共转染293T细胞,进行病毒包装,并用梯度稀释法测定病毒滴度.结果 通过PCR技术成功地扩增UGT1A1基因Q239X突变型片段并连接到GV358载体上,PCR鉴定及DNA测序结果示GV358-UGT1A1(p.Q239X)慢病毒表达载体构建成功.转染293T细胞后可观察到绿色荧光蛋白表达,测定其浓缩病毒滴度为2×108 TU/mL.结论 UGT1A1基因Q239X突变型过表达慢病毒载体构建成功,包装获得高滴度慢病毒,为UGT1A1基因的后续研究奠定了基础.