大鼠髓样细胞表达激发受体-1/人IgG融合蛋白真核表达载体的构建表达与鉴定

摘要

目的 构建大鼠髓样细胞表达激发受体-1(TREM-1)/人lgG融合蛋白的真核表达载体,并在家蚕Bm细胞中实现稳定表达.方法 克隆大鼠TREM-1胞外段与人1gGFe段,片段连接后PCR扩增,再与病毒穿梭载体BAC1连接,基因克降,构建重组质粒.利用]杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)筛选重组杆状病毒,在Bm细胞中进行融合表达,并用Western blot法行蛋白鉴定.结果 重组质粒酶切测序正确,确认克隆载体构建成功.Western blot结果说明该蛋白样品可被抗大鼠TREM-1抗体特异性识别,证明该蛋白为TREM-1/IgG融合蛋白.结论 成功构建了大鼠TREM-1/IgG融合蛋白真核表达载体,并在Bm细胞中稳定表达.