人脐静脉内皮细胞的原代培养及鉴定

摘要

目的:探讨新生儿脐静脉内皮细胞的培养及鉴定方法,建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验手段.方法:采用0.1%Ⅱ型胶原酶分离脐静脉内皮细胞,于M199培养基(含15%胎牛血清, 促内皮生长因子1%,青霉素100u/ml,链霉素100mg/ml)内培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化传代,并以倒置光显微镜观察内皮细胞生长情况,以免疫荧光方法对内皮细胞进行鉴定.结果:原代培养细胞在接种2h后开始贴壁生长,倒置光显微镜下观察细胞呈鹅卵石状排列,免疫荧光显示细胞胞浆内Ⅷ因子相关抗原阳性.结论:用胶原酶灌注消化脐静脉是获得内皮细胞的一种较可靠的方法.