产白藜芦醇大肠杆菌基因工程菌的构建

摘要

利用降落重叠延伸PCR和连接酶连接的方法,构建了组成型表达载体 pMD18-VvRs-At4cl,该表达载体带有大肠杆菌甘油醛三磷酸脱氢酶启动子(pGAP),拟南芥(Arabidopsis thalianna)4-香豆酸辅酶A连接酶(At4CL)基因和葡萄(Vitis vinifera)白藜芦醇合酶(VvRS)基因.表达载体转化大肠杆菌BW27784,并通过PCR鉴定和酶切鉴定后,获得重组菌株.对重组菌株进行发酵培养,对发酵液进行HPLC检测,发酵液中白藜芦醇含量为4.51 mg/L.这表明,拟南芥的4cl基因与金手指葡萄的rs基因在重组大肠杆菌中成功得到了表达,并且表达产物利用对香豆酸为前体物质合成了白藜芦醇.