利用双重PCR同时检测婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌方法的建立

摘要

建立能够同时检测婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌的双重聚合酶链式反应（Polymerse chain reaction,PCR）的方法。分别根据沙门氏菌和克罗诺杆菌16S rDNA序列设计特异性引物Cro和InvA。对待检奶粉样本进行预增菌后,提取菌液基因组DNA作为模板,进行双重PCR扩增,对其特异性、灵敏度和抗杂菌干扰能力进行评估。结果表明:两对引物分别可特异性扩增出140、630bp的目的条带。双重PCR同时检测婴幼儿配方奶粉样本中两种食源性致病菌的方法具有较高灵敏度,在经过4h预增菌后可检测到初始浓度为100CFU/g的克罗诺杆菌和初始浓度为100CFU/g的沙门氏菌,且在高浓度杂菌干扰下,灵敏度无下降。在人工污染奶粉样本检测中,两种致病菌的检出准确率均达95%以上。初步建立了能同步、快速、准确、灵敏地检测婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌的双重PCR方法。