养阴活血方药拮抗环孢素慢性肾毒性的大鼠体内实验研究

摘要

目的 探讨养阴活血方药拮抗环孢素(CsA)慢性肾毒性的作用及机制.方法 将50只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、依那普利组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组各10只.采用钠耗竭法制作大鼠CsA肾毒性模型:给予钠缺乏饮食,每日皮下注射CsA 12.5 mg/(kg·d),连续4周.同时,按组别相应予以蒸馏水、依那普利(依那普利10倍成人剂量)、低剂量中药(养阴活血方药5倍成人剂量)、中剂量中药(养阴活血方药10倍成人剂量)、高剂量中药(养阴活血方药20倍成人剂量)灌胃.建组后14 d、28 d记录各组大鼠死亡率.建组后7 d、14 d、21 d、28 d,测定各组大鼠的血清肌酐(Scr)、尿肌酐、24 h尿蛋白定量,计算内生肌酐清除率(Ccr).建组后28 d处死大鼠,取右肾组织进行病理学检查和免疫组织化学染色,观察细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分,包括纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、胶原蛋白(collagen,Col)Ⅳ和其调节因子转化生长因子(TGF)-β1的表达;取左肾组织进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),分别检测FN、ColⅣ、TGF-β1,以及抑制ECM生成基因包括组织型纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,tPA)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-plasminogen activator,uPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor,PAI)-1基因的核糖核酸(RNA)表达.结果 建组后14 d,中药高剂量组的死亡率为20%,依那普利组和对照组各为10%,中药中剂量组、中药低剂量组均无死亡.建组后28 d,除中药高剂量组的死亡率为20%、中药低剂量组的死亡率为0外,其余3组死亡率均为10%.建组7 d后各组大鼠肾功能逐渐恶化,24 h尿蛋白定量增加,于建组后14 d达到高峰.建组14 d后进入CsA慢性肾毒性期,各治疗组大鼠的肾功能均有所改善、24 h尿蛋白定量减少,但对照组仍然继续恶化.建组后28 d,中药高剂量组和中药中剂量组的Ccr明显高于对照组(均为P<0.05),中药各剂量组及依那普利组的24 h尿蛋白定量均低于对照组(P<0.05或P<0.01).肾组织病理切片常规苏木素-伊红(HE)染色表现为慢性CsA肾毒性肾间质纤维化,以对照组改变最为严重,依那普利组、中药低剂量组、中药中剂量组及中药高剂量组改变依次减弱.马松(Masson)染色可见肾小管及肾小球周围纤维增生,以对照组最为明显.免疫组织化学染色显示对照组的FN、ColⅣ及TGF-β1表达遍布肾小管皮质和髓质,依那普利组及中药各剂量组表达程度较轻.RT-PCR结果提示,FN基因的信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达强度以中药高剂量组最低、对照组最高;ColⅣ基因的mRNA表达强度以中药低剂量组最高,中药高剂量组最低;TGF-β1基因的mRNA表达强度以依那普利组、中药高剂量组最低,中药低剂量组表达最高.作为抑制ECM生成的tPA、uPA和PAI-1基因的mRNA在各组表达强度差异均无统计学意义.结论 养阴活血方药有类似依那普利拮抗大鼠CsA慢性肾毒性的作用,但对急性肾毒性无保护作用,其作用机制可能与下调TGF-β1等细胞因子,从而抑制ECM的合成有关.