毕赤酵母全细胞催化合成新型高倍甜味剂莱鲍迪苷A

摘要

本研究构建经密码子优化后的UDP-糖基转移酶UGT76G1和蔗糖合成酶AtSUS基因的重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-UGT/pPICZA-AtSUS,实现双酶在毕赤酵母中的胞内共表达.利用共表达菌株作为全细胞催化剂在体外进行催化反应,可成功将ST转化为RA,并在此基础上对其最适反应温度、反应pH、底物UDP浓度与底物蔗糖浓度条件进行优化.重组菌株经甲醇诱导,对不同发酵时间菌体的催化能力进行探究,确定发酵120h菌体催化能力最佳,RA产量为0.58 mg/mL.对共表达菌株催化体系中全细胞催化条件进行优化,优化后的催化体系为:反应pH7.0,UDP浓度1mM,蔗糖浓度70mM,MgCl2浓度3mM,ST浓度10mg/mL,将OD600为30的细胞与上述体系混合后在最适温度45℃下,200 r/min反应15h,重组菌可将10 mg/mL ST转化为7.46 mg/mL RA,为RA酶法生物合成及其产业化应用提供技术支持.