基于同源加尾系统的双重实时PCR方法鉴定混合肉样中猪成分比例

摘要

为了对掺入猪肉成分的比例进行鉴定,本研究拟建立基于同源加尾系统(Homo-tag Assisted Non-dimer system,HANDS)的双重实时PCR检测方法,借助简易数学模型将实时PCR的Ct值(循环阈值)换算成猪肉成分的百分比.根据常见家畜、家禽染色体中的管家基因Myostatin序列设计家禽家畜通用引物和探针序列,针对猪染色体beta actin基因设计猪源性成分特异型引物和探针序列,并在所有引物5'端加上同源引物.通过评估以上两套引物和探针的通用性,特异性,优化引物和探针浓度、退火温度,构建同源加尾双重实时PCR检测方法对不同猪源性成分比例的肉样进行检测并换算Ct值得出混合肉样中猪源性成分的比例.所构建的同源加尾双重实时PCR方法两重之间扩增效率相近,通用性引物、探针可以扩增所有家畜家禽成分,特异性引物探针只扩增猪源性成分.通过检测制备的混合肉样显示,该方法换算结果与肉样实际比例接近.