miR-122表达载体的构建及其对Bcl—xL，Bcl-2基因的抑制作用

摘要

目的构建miR-122真核表达载体并检测其表达对BEL-7402／5-Fu细胞中耐药相关基因Bcl—xL，Bcl-2基因表型的作用。方法人工合成miR-122成熟cDNA序列，以质粒载体pSilencer3．1-HIneo为母本，构建miR-122真核表达载体，空载体作为对照，利用脂质体2000和G418筛选稳转至BEL-7402／5-Fu细胞中。其中转染miR-122载体的细胞为miR-122转染组，转染空载体的细胞为空载体转染组，通过实时荧光定量RT．PCR检测未转染组、转染空载体组和miR-122转染组细胞中miR-122表达水平。验证miR-122载体是否在细胞中稳定表达。并通过实时荧光定量RT—PCR检测未转染组、空载体转染组和miR—t22转染组中耐药相关基因Bcl—xL，Bcl-2的基因表达情况。结果miR-122真核表达载体在BEL-7402／5-Fu细胞中稳定表达，与未转染组和空载体转染组比较，miR-122转染组中Bcl—xL，Bcl．2的基因表达水平显著降低。结论miR-122可下调耐药相关基因Bcl-xL，Bcl-2的基因表达，MiR-122是降低BEL-7402／5-Fu细胞的5-氟尿嘧啶药物敏感性影响的潜在因素。