双向电泳技术分析大鼠快慢肌蛋白的表达差异

摘要

目的:建立骨骼肌蛋白分离的双向电泳(2-DE)技术体系,分析趾长伸肌与比目鱼肌中快慢肌蛋白的表达.方法:提取大鼠趾长伸肌和比目鱼肌的总蛋白,定量,然后进行第一向等电聚焦(IEF)和第二向十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术分离总蛋白,GS-800获得凝胶图像,并测量不同凝胶间蛋白斑点在IEF和SDS-PAGE方向上的位置偏差,使用PDQuest7.3软件对凝胶图像进行分析,找出趾长伸肌与比目鱼肌蛋白表达的差异.结果:在趾长伸肌和比目鱼肌组织的蛋白表达谱上,分别检测到680±19和660±27个蛋白点,平均匹配点数为590±13和580±17,匹配率达86.7%和87.8%,不同凝胶问蛋白质点在IEF方向的偏差为(0.51±0.48)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(0.53±0.42)m,对比分析趾长伸肌和比目鱼肌组织的2-DE图谱,发现有27个点存在明显的表达差异,在比目鱼肌中高表达的点有12个,在趾长伸肌中高表达的点有15个.结论:建立了骨骼肌蛋白分离的双向电泳技术体系,发现成年大鼠趾长伸肌和比目鱼肌的双向电泳图谱相似,但是有部分蛋白质点存在表达差异,这些差异表达的蛋白,可能与快慢肌本身的生理特性相关.