牦牛背最长肌蛋白质双向电泳条件的建立

摘要

为建立高原牦牛背最长肌蛋白质双向电泳的最佳条件,以牦牛背最长肌为研究对象,比较了超高速离心法、三氯乙酸-丙酮法、Tris-酚法及双裂解法4种方法对总蛋白质的提取效果.凝胶采用快速银染法染色,经双向电泳,用ImageMaster 2D Platinum软件分析蛋白点,并通过质谱对分离的蛋白点进行鉴定.结果表明:超高速离心法提取的样品蛋白质量浓度最高,杂质最少,蛋白点分离程度最好,蛋白点拖尾及产生纵横条纹的现象不明显,获得531个蛋白点,数量最多.该方法比其他3种方法更简单快捷,耗时最短,仅需2.5 h,而另3种方法至少需4～6 h甚至过夜反应.随机选取的6个蛋白点鉴定为5种蛋白,分别为肌球蛋白调节轻链2(1、2号点为同一蛋白)、脂肪酸结合蛋白、苹果酸脱氢酶、葡萄糖磷酸变位酶1、过氧化物氧还酶-1.本实验成功建立了牦牛肉双向电泳分析方法.