双向凝胶电泳

摘要： 目的:探讨长期中小强度有氧运动对大鼠左室肌蛋白质组差异性表达的影响,筛选出对中小强度有氧运动刺激敏感的目标蛋白质,丰富运动健身的基础理论及为慢性心血管疾病的康复治疗提供新的思路和实验依据.方法:20只雄性SD大鼠随机分为运动组(E组)和对照组(C组)(n=10).建立大鼠长期中小强度有氧运动跑台训练模型,采用双向凝胶电泳(2-DE)对大鼠左心室肌全蛋白样品进行分离.采用串联飞行时间质谱蛋白质仪对部分分离后差异表达量上调大于5倍或下调超过80％的蛋白质点进行质谱鉴定.结果:与C组比较,E组大鼠心脏重量指数(HWI)增加了32.0％,具有显著性差异(P<0.05);与C组比较,E组有71个蛋白质点表达上调≥2倍或下调≥50％,对4个表达上调≥5倍或下调大于等于80％的蛋白质点进行质谱鉴定,鉴定出3个蛋白质和1个未知蛋白质.结论:长期中小强度有氧运动后,大鼠心脏发生了良好的适应性改变;大鼠左心室肌蛋白质组发生了明显变化,长期中小强度有氧运动能有效增强大鼠心肌抗氧化能力.

摘要： [目的]进行两种提取方法下马铃薯块茎蛋白质组结果差异分析,并确定最佳马铃薯块茎蛋白质提取方法.[方法]采用酚提取法和三氯乙酸/丙酮沉淀与乙酸铵/甲醇沉淀相结合的两步沉淀法提取马铃薯块茎蛋白质,进行2-DE分离,对差异表达蛋白质进行MALDI-TOF-MS质谱鉴定.[结果]两步沉淀法提取的马铃薯块茎蛋白质较酚提取法获得蛋白质纯度和浓度及蛋白质点数目均明显增加,双向电泳凝胶图谱分辨率较高.质谱鉴定结果表明,两步沉淀法中鉴定的差异表达蛋白质丰度均显著高于酚提取法,并鉴定到一些新出现的蛋白质包括假定的线粒体NAD依赖的苹果酸脱氢酶、酸性磷酸酶类似物和蛋白酶抑制剂II前体类型B.[结论]提取马铃薯块茎蛋白质时两步沉淀法优于酚提取法.

摘要： 目的 通过分析人低分化腺癌、中分化腺癌及癌旁远端正常组织的差异蛋白,寻找与肺腺癌发病相关的蛋白.方法 利用双向凝胶电泳的方法分离肺腺癌及癌旁组织的蛋白质,通过图像扫描寻找差异蛋白点,进而应用基质辅助激光电离飞行时间质谱得到肽质量指纹图谱,对比数据库确定差异蛋白.结果人中分化腺癌及癌旁远端正常组织、低分化腺癌及癌旁远端正常组织的平均蛋白点数分别为1810±167、1704±53、2066±144、1549±33.选取差异2倍以上蛋白点进一步分析,发现与肺腺癌相关的蛋白质共14个.结论 双向凝胶电泳技术结合基质辅助激光电离飞行时间质谱可鉴定肺腺癌及癌旁远端正常组织的差异蛋白,为早期诊断肺癌,判断预后奠定基础.

摘要： 目的:基于蛋白质组学的研究技术与方法,研究4周中等强度有氧运动对大鼠心房肌蛋白质组差异表达的影响,揭示中等强度有氧运动对心房肌物质能量代谢影响的规律.方法:建立速度24m/min、持续时间40min(负荷强度相当于60％-70％VO2max),持续训练4周的中等强度有氧运动实验动物模型.应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离心房肌蛋白质点,串联飞行时间质谱仪技术鉴定电泳结果中表达量上调≥5倍以上,下调至1/5以下的13个备选目标蛋白质点.结果:鉴定结果有7个与心房肌细胞物质能量代谢相关的蛋白或酶,其中线粒体乌头酸水合酶上调5.7倍,丙酮酸脱氢酶E1α1表达量上调6.4倍,线粒体琥珀酸脱氢酶黄素蛋白亚基下调6.9倍,甲基丙二酸半醛脱氢酶[酰基]上调6.3倍,异戊酰辅酶A脱氢酶下调6.9倍,线粒体二氢硫辛酸脱氢酶下调5.7倍,细胞质苹果酸脱氢酶表达量下调7.3倍.结论:①中等强度有氧运动诱导心房肌蛋白质组表达量与强度出现显著变化,同时诱发心脏出现生理性肥大.②筛选出甲基丙二酸半醛脱氢酶[酰基],该蛋白在运动生物医学领域尚未展开深入研究,为运动改善心房肌物质能量代谢的研究带来新的研究内容.③中等强度有氧运动可能改善心房肌物质氧化代谢水平,上述差异蛋白是否具有运动依赖性和蛋白之间的联系还需进一步验证.

摘要： 目的 分析人中分化肺腺癌及癌旁正常组织中的差异蛋白,寻找与肺腺癌发病相关的蛋白质.方法 利用双向凝胶电泳法分离肺腺癌及癌旁正常组织中的蛋白质,通过图像扫描寻找差异2倍以上蛋白点,进而应用基质辅助激光电离飞行时间质谱得到肽质量指纹图谱,对比数据库确定差异蛋白.结果 肺腺癌组织及癌旁正常组织平均蛋白点数分别为1 810±167、1 704±53.共筛选出18个差异蛋白点,其中13个差异蛋白点在肺腺癌组织中表达上升.结论 双向凝胶电泳技术结合基质辅助激光电离飞行时间质谱可鉴定肺腺癌及癌旁正常组织的差异蛋白,为早期诊断肺癌、判断预后提供依据.

摘要： 为了在蛋白表达水平上了解银杏(Ginkgo biloba)基于年龄变化的叶片蛋白质表达特征,寻找与年龄变化相关的响应蛋白,以楼观台老子手植银杏(约2 600年生)、说经台银杏(约800年生)和20年生幼龄银杏的叶片为研究对象,利用双向凝胶电泳(2-DE)和MALDI TOF/TOF MS/MS技术研究3个树龄银杏叶片蛋白质差异表达.蛋白质2-DE凝胶图谱经PD-Quest 8.0软件分析与检测分别得到340、341和410个点形规则清晰、可重复的蛋白点,这些蛋白点的分子质量大多分布在20～50 ku(占70％),等电点主要集中分布在pH 5～6.5(占75％);选取37个差异显著蛋白质凝胶点进行MALDI TOF/TOF MS/MS鉴定分析,成功鉴定30个蛋白质点,经过功能注释得出这些蛋白质主要参与能量及碳水化合物代谢(40％)、蛋白及氨基酸合成代谢(20％)及光合作用(16.7％)等途径;通过聚类分析得到基于年龄变化的蛋白质差异表达图谱,在高龄银杏叶片中上调表达的蛋白有11个,主要与光合作用、蛋白质及氨基酸代谢有关,下调表达的有8个,主要参与植物的能量及碳水化合物代谢.本研究明确了不同树龄银杏叶片差异蛋白参与的代谢途径,为进一步从分子水平深入了解银杏抗衰老的机理提供了理论基础.%In order to understand the protein expression on leaves of Ginkgo biloba with different ages and to look for the responded proteins and their age-based changes,the leaves from Ginkgo tree with three age stages (2600-,800-,and 20-year-old) were collected to conduct the differential proteomics by two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and MALDI TOF/TOF MS/MS.PD-Quest 8.0 software was used to analyze the profiles of 2-DE gels,from which 340,341,and 410 clear and regular reproducible protein spots were detected from the three-age groups,respectively.The molecular weights of detected protein spots were mostly between 20 and 50 ku (70％) and the isoelectric points were mainly distributed in the pH 5 ～6.5 (75％).Thirty seven significantly and differentially expressed protein spots were selected for MALDI TOF / TOF MS/MS and 30 protein spots were successfully identified.The majority of the identified protein species was classified into functional categories,including energy and carbohydrate metabolism (40％),protein and amino acid synthesis (20％) and photosynthesis (16.7％).The expression patterns of the identified proteins were analyzed by clustering analysis.From the leaves of aged trees,there were upregulated 11 protein species with functions in photosynthesis,protein and amino acid synthesis.However,8 down-regulated proteins were mainly related to energy and carbohydrate metabolism.This study clarified the metabolic pathways which differentially expressed proteins of the leaves from Ginkgo at different ages involved in and provided a theoretical basis for further understanding theanti-aging mechanism of Ginkgo at molecular level.

摘要： 目的：通过双向凝胶电泳建立脾虚证小鼠与正常小鼠脾脏蛋白质分辨率高,重复性好蛋白质表达图谱,并分析其差异表达蛋白质.方法：通过改良固相PH梯度双向凝胶电泳环节的条件,获得分辨率高的脾虚证小鼠与正常小鼠脾脏蛋白质图谱,PDquest8.0软件分析结果.结果：优化条件后能获得分辨率较高的,小鼠脾脏蛋白质双向电泳图谱.结论：通过对双向凝胶电泳环节条件的摸索和优化,建立了一套适合小鼠脾脏组织蛋白质双向凝胶电泳技术,获得了分辨率较高的电泳图谱.

摘要： 为了分析和检测三个不同血清型副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum)膜蛋白的差异蛋白质,本试验采用FOCUSTMGlobal Fractionation试剂盒制备副鸡禽杆菌A(221株)、B(0222株)、C(Modesto株)3个血清型参考菌株的膜蛋白,利用双向凝胶电泳分离膜蛋白,凝胶用考马斯亮蓝染色后,筛选差异蛋白点并进行串联质谱鉴定.结果表明,电泳图谱相互比较筛选出的21个差异蛋白点中有17个点经质谱鉴定为有效蛋白点,在生物信息数据库中搜索为对应的9种蛋白质:6—磷酸葡萄糖酸脱氢酶、假定血红素铁利用蛋白质、OsmC/Ohr家族蛋白、核糖体蛋白质、脯氨酰—顺反异构酶、磷酸丙糖异构酶、ABC转运蛋白、超氧物歧化酶、IMP环水解酶,该试验结果建立了有关副鸡禽杆菌膜蛋白宝贵的生物信息,为今后鸡传染性鼻炎特异性蛋白疫苗的开发提供了有力的实验依据.

摘要： 目的:阐释蛋白质组学在肝损伤本质研究中的应用现状及对策.rn 方法:查阅国内外相关研究资料并对其进行汇总和分析.rn 结果:①蛋白质组学技术已应用于药源性肝损伤(DILI)、四氯化碳(CCl4)肝损伤、酒精性肝损伤、脂多糖(LPS)肝损伤、免疫性肝损伤、硫代乙酰胺肝损伤、放射性肝损伤、溴苯肝损伤、肼肝损伤、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)等多种类型肝损伤本质研究中,其中尤以在DILI中的应用最为多见;②测试用蛋白样品主要取自动物肝和血清,偶亦用到尿液、胆汁酸、线粒体等;③双向凝胶电泳(2-DE)、MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)和多级MS是其主要分析工具;④肝损伤的蛋白质组机理研究广度和深度有待加强;⑤药物保肝作用的蛋白质组本质研究相对较少.rn 结论:应加强蛋白质组学在肝损伤本质研究中应用的深度，以促进肝损伤本质的全面揭示;应加强蛋白质组学在药物保肝本质研究中的应用力度，从而为保肝药物的科学应用提供更深入更全面的科学依据。

摘要： 提取感染组和对照组的兔肝脏总蛋白，采用双向凝胶电泳技术比较分析差异表达蛋白;经MALDI-TOF-TOF质谱分析，搜索蛋白质数据库，获得差异蛋白质的信息。经过初步筛选和质谱分析，共获得60个具有统计学意义的表达差异蛋白点，其中19个在感染中表达上调，41个表达下调。通过比较人工感染兔出血热病毒(RHDV)组和对照组兔肝脏整体蛋白表达谱，筛选出了5种可能在病毒整个感染过程中起作用的差异蛋白。

摘要： 目的：通过对冠心病陈旧性心肌梗死血瘀证患者与正常健康人的血清进行双向凝胶电泳蛋白质比较分析，寻找与冠心病血瘀证相关的蛋白质组学特点。方法：采用蛋白质组学双向凝胶电泳联合质谱的技术方法对8例冠心病陈旧性心肌梗死血瘀证患者和8例正常健康人的血清进行了蛋白质组学比较研究，寻找与陈旧性心肌梗死血瘀证相关的差异蛋白质。结果：发现了在冠心病陈旧性心肌梗死血瘀证与健康人血清之间表达存在差异的5种蛋白质：ApoE、CD5antigen-like precursor、Haptoglobin、Serum albumin。其中，Haptoglobin、Serum albumin在血瘀证组表达上调，ApoA-1表达下调。结论：与冠心病陈旧性心肌梗死血瘀证相关的蛋白质主要与炎症反应和脂质代谢相关。

摘要： 重症胰腺炎(SAP)是临床常见急症。其中急性肺损伤(ALI)是SAP最常见的并发症，但至今其病因及发病机制研究尚未完全阐明。而蛋白质组学是在蛋白质的整体水平上对生物体进行研究。本研究试图通过双向凝胶电泳和质谱技术等蛋白质组学技术寻找并鉴定SAP并ALI的差异表达蛋白，寻找SAP并ALI的疾病相关蛋白，探讨为SAP并ALI的分子机制，并为其诊断、鉴别诊断以及治疗提供新的理论依据和研究线索。

摘要： 目的:探讨慢性重型乙肝血浆置换(PE)治疗前后的血浆蛋白质组变化，为研究PE治疗重型肝炎的作用机制及寻找治疗靶标提供新的线索。方法:收集慢性重型乙肝患者PE前后血浆各15份，去除血浆中高丰度蛋白质。应用双向凝胶电泳(2-DE)技术构建两组研究对象血浆蛋白2-DE图谱，经Image Master差异分析软件进行分析，寻找差异蛋白质点。用电喷雾离子串联质谱(ESI-MS/MS)对重要的差异蛋白质点进行鉴定。结果:经过样品预处理后，血浆中自蛋白和免疫球蛋白IgG等高丰度蛋白质含量明显减少，低丰度蛋白得到较好的富集。PE前组蛋白质点297个，PE后组蛋白质点305个。筛选出3倍以上的差异蛋白质点15个，鉴定了5个差异蛋白质，其中在PE后血浆中上调的蛋白质有补体因子B(CFB，点1)、CD5 antigen-like蛋白(CD5antigen-like precursor，点2)、纤维蛋白原B链(FGB，点3)、触珠蛋白(haptoglobin precursor，点4)，下凋的蛋白质有载脂蛋白E(Apo-E，点5)。结论:鉴定了5个PE治疗前后差异表达的蛋白质。这些蛋白表达的改变提示PE可以干预机体脂蛋白代谢、蛋白质分解合成代谢。并能调节机体免疫功能。补体旁路活化途径等。深入研究这些蛋白质结构和功能对于进一步揭示PE的治疗作用机制具有重要的临床意义。

摘要： 目的:应用蛋白质组学技术比较早期肺鳞癌组织和癌旁正常组织间的蛋白表达谱,以期发现早期肺癌癌变相关蛋白。rn 方法:利用双向凝胶电泳技术分离人早期肺鳞癌组织和相应癌旁正常组织总蛋白,选择差异蛋白质点进行MALDI-TOF质谱分析和生物信息学分析。免疫组化技术验证部分差异蛋白质(ANX Ⅰ和HSP27)在肺鳞癌组织和癌旁正常组织中的差异表达。rn 结果:肺鳞癌组织与癌旁正常组织的双向凝胶电泳图谱中平均蛋白质点数分别为626和602。选择在癌组织中高表达的10个差异蛋白点进行质谱分析,最终鉴定为ANX Ⅰ、HSP27等与细胞周期、信号转导、转录及翻译等功能相关的蛋白质。免疫组化方法检测结果显示ANX Ⅰ和HSP27在肺鳞癌组织中的阳性表达率均显著增高(P<0.05)。rn 结论:蛋白质组学方法是一种用于初步筛选早期肺癌相关蛋白的有效方法,本研究所鉴定的早期肺鳞癌相关蛋白为进一步筛选用于肺癌的早期诊断及其治疗的分子标志奠定了基础。

摘要： 本试验利用2DE SDS-PAGE技术结合质谱鉴定技术，分离鉴定水牛卵母细胞成熟前后蛋白质的变化，以阐明卵母细胞的发育规律，为提高卵母细胞体外成熟的研究奠定的理论基础。

摘要： 本试验利用2DE SDS-PAGE技术结合质谱鉴定技术，分离鉴定水牛卵母细胞成熟前后蛋白质的变化，以阐明卵母细胞的发育规律，为提高卵母细胞体外成熟的研究奠定的理论基础。

摘要： 用于单细胞凝胶电泳的凝胶电泳设备，具有用于容纳凝胶电泳缓冲液的腔室(7a)、用于闭合腔室的功能盖板(7b)、至少一个用于在腔室中产生均匀电场的电极对(8,8’)和至少一个用于容纳和定位至少一个承载板(1)的压紧元件(6)。该至少一个压紧元件(6)将至少一个承载板(1)定位在由至少一个电极对(8,8’)所产生的均匀电场中。

摘要： 本发明公开了一种植物质膜蛋白再溶解的方法及其在双向荧光差异凝胶电泳中的应用。本发明提供的植物质膜蛋白再溶解的方法，包括如下步骤：将植物质膜蛋白加入裂解液中，在冰浴中超声处理，然后涡混使所述植物质膜蛋白溶解，最后离心收集上清液，即为植物质膜蛋白溶液；所述裂解液是在DIGE裂解缓冲液中加入N-十二烷基-β-D-麦芽糖苷并使其浓度为0.5-2g/100mL得到的。植物质膜蛋白的丰度低，疏水性强，其提取及再溶解存在着一定的难度，给质膜蛋白质组学的研究带来了极大的挑战。采用本发明提供的再溶解方法，植物质膜蛋白的提取效率增加了近两倍，进行2-DDIGE后能够得到重复性好，分辨率高的电泳结果比现有方法显示更多的蛋白点。

摘要： 用于单细胞凝胶电泳的凝胶电泳设备，具有用于容纳凝胶电泳缓冲液的腔室(7a)、用于闭合腔室的功能盖板(7b)、至少一个用于在腔室中产生均匀电场的电极对(8,8’)和至少一个用于容纳和定位至少一个承载板(1)的压紧元件(6)。该至少一个压紧元件(6)将至少一个承载板(1)定位在由至少一个电极对(8,8’)所产生的均匀电场中。

摘要： 本发明公开了种植物质膜蛋白再溶解的方法及其在双向荧光差异凝胶电泳中的应用。本发明提供的植物质膜蛋白再溶解的方法，包括如下步骤：将植物质膜蛋白加入裂解液中，在冰浴中超声处理，然后涡混使所述植物质膜蛋白溶解，最后离心收集上清液，即为植物质膜蛋白溶液；所述裂解液是在DIGE裂解缓冲液中加入N-十二烷基-β-D-麦芽糖苷并使其浓度为0.5-2g/100mL得到的。植物质膜蛋白的丰度低，疏水性强，其提取及再溶解存在着一定的难度，给质膜蛋白质组学的研究带来了极大的挑战。采用本发明提供的再溶解方法，植物质膜蛋白的提取效率增加了近两倍，进行2-DDIGE后能够得到重复性好，分辨率高的电泳结果比现有方法显示更多的蛋白点。

摘要： 双向平板凝胶电泳装置，包括上下槽。上槽含两侧壁、底板构成的H形支架，两侧壁设圆孔和电极插板槽道。上槽设前、后壁，前壁是上、下边均设凹口的平板。后壁是矩形平板。本发明含一块可叠置于上槽平行双凹平板，两者几何形状、面积相同的双凹平板，后者左右垂直边放置间条，上覆玻板，用夹固定。本发明另含一块可叠置于上槽平行双凹平板的垂直双凹平板，后者两凹口呈垂直走向；后者垂直边上的凹口，嵌一短间条。左右垂直边放置常规长间条，上覆玻璃板，用夹固定。本发明含又一块可叠置于上槽平行双凹平板的开三凹口平板；该三凹平板两垂直边凹口，用间条嵌补，左右边放置常规间条，上覆玻板，夹定。

摘要： 本发明为蛋白质的胶内检测和定量提供了一种新的仪器设计。这种新平台称为累积的时间分辨发射双向凝胶电泳(CuTEDGE)，利用荧光寿命成像的差异来区分来自特异性蛋白质标记的荧光和非特异性背景荧光，致使与现有技术相比在灵敏度和动态范围方面均有明显的改进。该平台主要用于双向凝胶电泳的图像获取，但也用于单向凝胶系统的蛋白质检测以及电转移到例如PVDF膜上的蛋白质。考虑到与现有方法相比，在检测和动态范围方面增加了高达5-6个数量级，所描述的发明在低丰度细胞蛋白质的检测中代表了技术的飞跃，这种技术的飞跃是生物标志物发现的领域中迫切需要的。

摘要： 本发明公开了一种重金属胁迫下水稻总蛋白的双向凝胶电泳分离方法，包括：(a)提取水稻根蛋白粗品，用乙醚和乙醇的混合溶液洗涤，冷冻干燥后溶于裂解液，水浴加热0.5～2小时，离心，取上清液用丙酮沉淀，离心分离沉淀，冷冻干燥；(b)将沉淀溶于增溶液中，用冷丙酮于-20～-15°C沉淀，离心分离沉淀，重复该步骤2～4次后，将沉淀冷冻干燥；(c)将步骤(b)获得的沉淀溶于增溶液中，利用双向凝胶电泳分离。本发明方法通过增加尿素和硫脲等不同强度的表面去垢剂和多种离液剂，再通过添加PVP和乙醇乙醚的洗涤来去除其它杂质，最后还通过分步溶解来获得更纯的蛋白，同时降低蛋白样品的复杂性，得到了高纯度的水稻根总蛋白。

摘要： 本发明公开了一种结合双向凝胶电泳和质谱鉴定糖蛋白糖链结构的方法。所述方法包括以下步骤：S1、对生物样本中的糖蛋白进行特异性富集并通过双向凝胶电泳进行分离，根据目标糖蛋白的分子量和等电点选定目标糖蛋白异构体凝胶斑点；S2、使用双向凝胶电泳蛋白印迹和质谱对选定的目标糖蛋白异构体凝胶斑点进行确认；S3、对步骤S2中确认了的目标糖蛋白异构体凝胶斑点进行胶内酶解和质谱分析，鉴定其肽段序列和糖链结构。本发明适用于各种蛋白翻译后修饰(糖基化，泛素化和乙酰化等)生物标志物异构体和修饰体的分离以及结构鉴定，可以显著提高翻译后修饰蛋白作为诊断标志物的灵敏度和特异性。

摘要： 本发明为蛋白质的胶内检测和定量提供了一种新的仪器设计。这种新平台称为累积的时间分辨发射双向凝胶电泳(CuTEDGE)，利用荧光寿命成像的差异来区分来自特异性蛋白质标记的荧光和非特异性背景荧光，致使与现有技术相比在灵敏度和动态范围方面均有明显的改进。该平台主要用于双向凝胶电泳的图像获取，但也用于单向凝胶系统的蛋白质检测以及电转移到例如PVDF膜上的蛋白质。考虑到与现有方法相比，在检测和动态范围方面增加了高达5-6个数量级，所描述的发明在低丰度细胞蛋白质的检测中代表了技术的飞跃，这种技术的飞跃是生物标志物发现的领域中迫切需要的。

摘要： 本发明公开了一种重金属胁迫下水稻总蛋白的双向凝胶电泳分离方法，包括：(a)提取水稻根蛋白粗品，用乙醚和乙醇的混合溶液洗涤，冷冻干燥后溶于裂解液，水浴加热0.5～2小时，离心，取上清液用丙酮沉淀，离心分离沉淀，冷冻干燥；(b)将沉淀溶于增溶液中，用冷丙酮于-20～-15°C沉淀，离心分离沉淀，重复该步骤2～4次后，将沉淀冷冻干燥；(c)将步骤(b)获得的沉淀溶于增溶液中，利用双向凝胶电泳分离。本发明方法通过增加尿素和硫脲等不同强度的表面去垢剂和多种离液剂，再通过添加PVP和乙醇乙醚的洗涤来去除其它杂质，最后还通过分步溶解来获得更纯的蛋白，同时降低蛋白样品的复杂性，得到了高纯度的水稻根总蛋白。