枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的分泌表达

摘要

目的:研制高效分泌表达枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的毕赤酵母基因工程菌株.方法与结果:将优化设计的枯草芽孢杆菌MA139 β-甘露聚糖酶基因用EcoR Ⅰ/XbαⅠ双酶切,克隆到诱导型表达载体pPICzαA中α因子信号肽编码序列的下游,转化大肠杆菌筛选重组质粒,转化毕赤酵母X-33感受态细胞,经Zeocin筛选,获得重组表达菌株X-33/mann.将重组菌株在10 L全自动发酵罐中进行高密度发酵培养,甲醇诱导72 h发酵活力达到2100 U/mL.重组甘露聚糖酶的最适催化温度为40℃,最适催化pH值为6.0.结论:枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中获得了高效分泌表达,具有开发作为饲料添加剂的潜能.