M2型TAMs激活NF-κB通路促进结肠癌细胞侵袭转移的实验研究

摘要

目的:观察M2型肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)对结肠癌LoVo细胞侵袭转移的影响,探讨其可能的作用机制.方法:建立M2型TAMs与LoVo细胞共培养体系.采用流式细胞术检测M2型TAMs生物标记分子CD163、CD206的表达情况以明确M2型TAMs诱导成功,细胞划痕实验检测M2型TAMs对细胞迁移能力的影响,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液IL-10、TGF-β1的浓度,蛋白印迹法(Western Blot)检测NF-κB通路及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达水平,免疫荧光技术检测NF-κB p65及E-cadherin入核情况.结果:流式细胞术检测结果显示,诱导后的TAMs高表达CD163、CD206;划痕实验结果显示,随着M2型TAMs浓度增加,LoVo细胞迁移能力增强(P<0.05);酶联免疫吸附测定结果显示,随着M2型TAMs浓度增加,细胞上清液中IL-10、TGF-β1的浓度增加(P<0.05);Western Blot结果表明,M2型TAMs可以明显上调IKKα、IKKβ蛋白表达(P<0.05),抑制IκBα蛋白表达(P<0.05),促进EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin及ZEB1的表达,抑制E-cadherin的表达(P<0.05);免疫荧光结果显示,随着M2型TAMs浓度增加,NF-κB p65入核增多,E-cadherin入核减少.结论:M2型TAMs可以激活NF-κB通路,进而介导EMT发生.