低表达miR-27a对胶质瘤细胞侵袭和凋亡的影响

摘要

目的 探讨下调miR-27a表达后对U87胶质瘤细胞的影响.方法 常规培养U87细胞系,分别用慢病毒干扰质粒miR-27a-3p、miR-27a-5p转染U87细胞(Lt-I),同时设立无义序列转染组(Lt-NC组)和空白对照组.通过嘌呤霉素处理后筛选出稳定感染的U87胶质瘤细胞.采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后miR-27a-3p、miR-27a-5p在U87细胞系中的表达水平,划痕实验、Transwell侵袭试验检测胶质瘤细胞的侵袭、迁移能力,Western blot法分析转染后的侵袭和凋亡的变化,流式细胞术分析转染前后细胞凋亡的变化,磁共振成像(MRI)和裸鼠皮下胶质瘤模型分析裸鼠肿瘤的形态、直径等特征及随时间的变化规律.结果 相对于未感染慢病毒的空白U87胶质瘤细胞,稳定感染Lt-I的U87胶质瘤细胞miR-27a表达明显下调,同时迁移、侵袭能力降低,而感染Lt-NC组(阴性对照组)则未见此改变.Western blot法检测结果显示,低表达miR-27a细胞侵袭能力降低,同时也促进细胞凋亡.流式细胞术结果显示,敲减miR-27a后,细胞凋亡率增高.磁共振成像(MRI)和裸鼠皮下胶质瘤模型显示,实验组裸鼠肿瘤的生长明显受到抑制.结论 敲减miR-27a可抑制人脑胶质瘤细胞系U87细胞的迁移、侵袭,促进其凋亡,同时抑制其成瘤能力,这可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点.