带有荧光素酶报告基因的可调控重组腺病毒载体的构建及表达

摘要

目的:构建带有萤火虫荧光素酶报告基因的可调控腺病毒载体,并在SW620结肠癌细胞株中观察其调控表达.方法:将萤火虫荧光素酶luc基因和启动子,以及RU486调控系统构建成单一的穿梭载体PDC-RULUC,将其与Admax腺病毒包装系统的辅助质粒共转染293细胞后,构建出可调控的重组腺病毒载体.扩增后用最终稀释法测定了其滴度,并在SW620细胞中检测了其基因调控效果,结果:成功地构建了携带有RU486调控系统的可调控腺病毒载体Ad-RULUC,病毒滴度达到5.2×1013pfu/L.当给予诱导剂RU486后,腺病毒载体可以诱导表达荧光索酶,并在一定范围内两者呈正比,而没有RU486时,几乎没有报告基因的表达.结论:腺病毒Ad-RULUC能调控外源基因的表达,为基因调控研究和基因治疗提供了良好的工具.