携带有Survivin启动子的重组腺病毒载体的构建及鉴定

摘要

目的 构建携带有Survivin启动子的重组腺病毒载体,检测其在人膀胱癌细胞株BIU87和人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-I中的表达.方法 用PCR扩增Survivin基因的启动子片段,构建分别携带Survivin 启动子和CMV启动子的真核表达载体pSurp-EGFP和pCMV-EGFP,体外连接法制备重组腺病毒AdenoSP-EGFP和Adeno-CMV-EGFP,分别转染BIU87及SV-HUC-1,荧光显微镜下观察EGFP的表达.结果 成功克隆440 bp的Survivin基因启动子,并构建了携带有Survivin基因启动子的重组腺病毒Adeno-SPEGFP,其转染BIU87及SV-HUC-1后,在荧光显微镜下可以观察到BIU87细胞呈现出较强绿色荧光,而SVHUC-1细胞中仅有散在少量绿色荧光.结论 成功制备的携带有Survivin启动子的重组腺病毒Adeno-SPEGFP在BIU87细胞中表现出较高的肿瘤特异性活性,为下一步进行肿瘤特异性的基因治疗研究奠定了基础.