粘红酵母酪氨酸解氨酶在大肠杆菌中的异源表达

摘要

酪氨酸解氨酶是苯丙氨酸代谢途径的关键酶之一.酪氨酸经其催化生成对香豆酸,可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物.作者选取来源于粘红酵母(Rhodotorula glutinis)的酪氨酸解氨酶,对其基因进行大肠杆菌(Escherichia coli)密码子偏好性优化,合成基因后于E.coli BL21 (DE3)中成功表达.经过硫酸铵分级沉淀、QFF阴离子交换层析、分子筛纯化后得到了纯化的酪氨酸解氨酶,比酶活达到1.78 U/mg.在相同的培养条件下,以不同的质粒作为表达载体,获得了不同的对香豆酸产量.其中以酪氨酸为底物发酵24 h,当以pET-32a(+)作为表达载体时,获得最高的对香豆酸产量196.3 mg/L.经密码子优化后的酪氨酸解氨酶基因可更好地应用于苯丙素类物质的合成途径构建,不同载体的应用也为生物法生产对香豆酸提供了更多的选择依据.