实时荧光环介导等温扩增技术快速检测牛肉中的大肠杆菌O157

摘要

目的 建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)快速检测大肠杆菌(Escherichia coli,EHEC)O157的分析方法.方法 针对大肠杆菌O157编码O抗原的rfbE基因设计引物.对该方法进行特异性验证,同时对大肠杆菌O157∶H7纯培养物的灵敏度和人工污染牛肉的检出限进行测定,对61份牛肉样品进行RF-LAMP检测,并与GB 4789.36-2016方法进行比较,评价RF-LAMP方法的敏感性、特异性和准确度.结果 10株大肠杆菌O157呈阳性结果,21株非大肠杆菌O157呈阴性结果,该方法特异性良好.纯培养物检测的灵敏度为5.1 CFU/mL,人工污染的牛肉样品的检出限为5.1 CFU/g.结论 本研究建立的RF-LAMP技术特异性好、灵敏度高、操作简单,可实时监测扩增反应,避免了繁琐的电泳过程,实现了对大肠杆菌O157的快速检测,对大肠杆菌O157引起的食源性疾病的预防和控制具有重要意义.