实时荧光环介导等温扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的建立与评价

摘要

目的 建立实时荧光环介导恒温扩增(Rea-LAMP)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法.方法 针对葡萄球菌的mecA耐药标志性基因和SA特有的femA基因的6个区域设计6条特异性引物,对MRSA、MSSA以及其他菌株等19株标准菌株的全基因组DNA进行Rea-LAMP,评价这些标准菌株的特异性、灵敏度和重复性;根据这些标准菌株的特异性,用Rea-LAMP反应体系检测临床分离的68株金黄色葡萄球菌(SA)菌株,并与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果进行比较.结果 本研究体系的引物扩增效果好,无引物二聚体,在19株标准菌株的检测中,除了MRSA和MSSA有相应的反应曲线外,其余菌株均为阴性;本体系的灵敏度可达1μg/L,68株临床SA菌株检测结果与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果一致.结论 Rea-LAMP反应体系检测MRSA特异性强、稳定性好、灵敏度高、操作简单快捷,可用于MRSA的快速检测.