环介导恒温扩增

摘要： 目的 建立实时荧光环介导恒温扩增(Rea-LAMP)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法.方法 针对葡萄球菌的mecA耐药标志性基因和SA特有的femA基因的6个区域设计6条特异性引物,对MRSA、MSSA以及其他菌株等19株标准菌株的全基因组DNA进行Rea-LAMP,评价这些标准菌株的特异性、灵敏度和重复性;根据这些标准菌株的特异性,用Rea-LAMP反应体系检测临床分离的68株金黄色葡萄球菌(SA)菌株,并与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果进行比较.结果 本研究体系的引物扩增效果好,无引物二聚体,在19株标准菌株的检测中,除了MRSA和MSSA有相应的反应曲线外,其余菌株均为阴性;本体系的灵敏度可达1μg/L,68株临床SA菌株检测结果与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果一致.结论 Rea-LAMP反应体系检测MRSA特异性强、稳定性好、灵敏度高、操作简单快捷,可用于MRSA的快速检测.

摘要： 目的 建立实时荧光环介导恒温扩增(Rea-LAMP)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法 针对葡萄球菌的mec A耐药标志性基因和SA特有的fem A基因的6个区域设计6条特异性引物,对MRSA、MSSA以及其他菌株等19株标准菌株的全基因组DNA进行Rea-LAMP,评价这些标准菌株的特异性、灵敏度和重复性;根据这些标准菌株的特异性,用Rea-LAMP反应体系检测临床分离的68株金黄色葡萄球菌(SA)菌株,并与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果进行比较。结果 本研究体系的引物扩增效果好,无引物二聚体,在19株标准菌株的检测中,除了MRSA和MSSA有相应的反应曲线外,其余菌株均为阴性;本体系的灵敏度可达1μg/L,68株临床SA菌株检测结果与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果一致。结论 Rea-LAMP反应体系检测MRSA特异性强、稳定性好、灵敏度高、操作简单快捷,可用于MRSA的快速检测。

摘要： 为建立米饭中的蜡样芽孢杆菌微流控芯片恒温扩增快速检测方法,利用蜡样芽孢杆菌公开的hblA基因序列设计引物,加入荧光染料SYTO-9,采用微流控芯片通过环介导恒温扩增进行实时荧光读数,并通过24株菌株验证其特异性;分别用阳性质粒和阳性菌株测试其灵敏度、检出限和重复性.结果表明:2株蜡样芽孢杆菌呈阳性,22株非蜡样芽孢杆菌呈阴性;微流控芯片恒温扩增技术检测蜡样芽孢杆菌菌液的灵敏度为170 CFU/mL,检测时间在35 min内;使用合成的蜡样芽孢杆菌阳性质粒样品,其灵敏度为10μL-1,检测时间在15 min内,比传统分离鉴定方法的灵敏度高10倍;人工污染米饭中蜡样芽孢杆菌的检出限为570 CFU/g,并可在45 min内完成结果判定;蜡样芽孢杆菌阳性质粒检测重复性好,其变异系数(coefficient of variation,CV)为2.02％.综上所述,微流控芯片恒温扩增快速检测方法特异性好、灵敏度高、结果准确,可用于米饭类食品中蜡样芽孢杆菌的快速检测.

摘要： 目的 建立一种环介导恒温扩增(LAMP)结合纳米生物传感器(LFB)快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的快速方法,为临床检测提供依据.方法 针对类鼻疽伯克霍尔德菌的Ⅲ型分泌系统基因设计LAMP特异性引物,建立LAMP方法,通过纳米生物传感判断结果,并应用临床样本对该方法进行评价.结果 LAMP-LFB检测的最佳扩增条件为67°C反应40 min,对类鼻疽伯克霍尔德菌纯培养物DNA灵敏度达到100 fg,对258株菌株进行检测,包括227株类鼻疽伯克霍尔德菌和31株非类鼻疽伯克霍尔德菌,特异性为100％.应用于46个临床样本检测时,与传统分离培养方法相比,达到100％的诊断准确率.LAMP-LFB整个检测过程可在1h内完成,包括15 min DNA制备,40 min LAMP扩增,2 min的LFB结果判读.结论 本研究建立的LAMP-LFB技术是一种快速、灵敏、特异的检测类鼻疽伯克霍尔德菌的方法,可作为类鼻疽基础、现场和临床实验室诊断的潜在工具.

摘要： 目的 建立基于磁珠捕获和连接的环介导恒温扩增(CLIP-LAMP)方法体系,以适用于大体积样品处理,为病原体检测提供一种新的技术方法.方法 在NCBI数据库搜索免疫缺陷病毒(HIV)的一段保守序列,使用实验室特有软件根据该保守序列设计相应的捕获探针和检测探针.磁珠表面通过亲和作用偶联寡核苷酸来抓取捕获探针;由于特异性捕获探针的存在使得核酸提取步骤被省略,靶标DNA或RNA直接特异地结合捕获探针;检测探针经过连接步骤后作为最终模板参与荧光定量环介导恒温扩增反应.将此方法用于HIV体外转录(IVT)合成的RNA检测,并且评估方法的灵敏度和特异性.结果 构建的方法体系成功应用于HIV的IVT检测;现阶段可以检测到32 CPs/μL.该方法有可能处理>1 mL的大体积样本,并且可在2 h内完成检测.结论 建立了基于磁珠的CLIP-LAMP技术,为快速、简便地进行大体积病原体检测提供了新的方法和思路.

摘要： 目的 对比多色巢式荧光定量PCR(X-pert MTB/RIF)、实时荧光RNA恒温扩增检测(SAT)和环介导恒温扩增(LAMP)诊断肺结核的价值.方法 选取2017年1月-2019年6月我院87例初次复治肺结核患者作为研究对象,同时选择我院同期收治的33例非肺结核患者为对照,收集其痰液标本进行X-pert、SAT、LAMP检测并分析诊断效能,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析三者诊断肺结核的诊断价值.结果 87份初次复治肺结核患者标本中,痰涂片阳性肺结核41例,阴性肺结核46例.120份标本中,X-pert检出肺结核检出率为61.67％(74/120),SAT为70.83％(85/120),LAMP为65.83％(79/120),三者比较无统计学意义(P>0.05),以临床诊断结果为标准,SAT诊断肺结核敏感度为93.10％(81/87),明显高于X-pert敏感度82.76％(72/87)(P0.05).87例肺结核标本中,SAT检测涂阴肺结核检出率为50.57％(44/87)、LAMP为45.98％(40/87),均明显高于X-pert的31.03％(27/87)(P0.05);X-pert、SAT和LAMP诊断涂阴肺结核的AUC分别为0.747(95％CI:0.643-0.85)、0.863(95％CI:0.779-0.947)、0.843(95％CI:0.754-0.931),三者诊断效能依次为SAT>LAMP>X-pert,比较无统计学差异(P>0.05).结论 X-pert、SAT、LAMP诊断肺结核效能较好,可用于辅助诊断肺结核疾病,SAT、LAMP对涂阴肺结核具有更好的检出率.

摘要： 目的 建立布鲁菌的实时荧光环介导恒温扩增(RealAmp)快速检测方法 .方法 针对布鲁菌属保守基因OMP 25,设计4套引物.通过引物筛选建立RealAmp检测布鲁菌的方法,并对此方法的灵敏度、特异性进行评价.结果 该方法对非布鲁菌属标准菌株DNA扩增结果 呈阴性,表明实验具有良好的特异性.RealAmp法检测布鲁菌DNA在30 min内即可完成,该方法检测灵敏度可达到1.2×10-5 ng/μL.结论 该研究建立的RealAmp测定方法简便、快速、灵敏,并且不依赖任何特殊设备,有望成为快速检测布鲁菌的新方法.

摘要： 目的 评价恒温扩增芯片法在儿童下呼吸道感染病原体检测中的应用价值.方法 纳入2017年1～7月于首都医科大学附属北京儿童医院住院的下呼吸道感染患儿,入院当天采集痰液等分泌物标本,通过恒温扩增芯片法(芯片法)检测13种常见病原体,比较芯片法与痰培养和血清学方法的检出率.结果 研究期间应用恒温扩增芯片法共检测230例下呼吸道感染住院患儿,共检出182例(79.1％)病原阳性.单一病原感染77例(33.5％),混合感染105例(45.6％).芯片法检出的主要病原菌为耐甲氧西林葡萄球菌(33.8％)、流感嗜血杆菌(27.8％)和肺炎链球菌(22.6％),芯片法对流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的阳性检出率明显高于培养法.两种方法对于铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和肺炎支原体等的检出率差异无统计学意义.结论 对于儿童下呼吸道感染病原体检测,芯片法操作简便、快速,可同时检测13种病原体,且病原体检出率明显高于培养法.

摘要： 本研究旨在建立肠毒素性大肠杆菌F5菌毛的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法.针对编码F5菌毛基因保守区域设计并合成4条引物,以大肠杆菌(F5+)基因组DNA为模板,分别进行了反应温度和反应时间的优化试验、特异性试验、敏感性试验和模拟样品检测试验.结果显示,用所建立的LAMP方法,61°C水浴45min即可完成对阳性样品扩增,所得产物电泳后呈特征性梯状条带,阴性样品的扩增产物电泳后均无扩增条带.本方法对F5菌毛的最低检出量为72CFU/管,敏感性高于PCR方法(7.2×102CFU/管).LAMP和PCR对模拟样品检测结果的符合率为100％.该研究为肠毒素性大肠杆菌F5菌毛的快速检测提供了新的方法.

摘要： 本研究检测了分离自发病大菱鲆、半滑舌鳎及鲤鱼的22株病原鳗弧菌毒力基因的携带情况,并建立了病原鳗弧菌的分子生物学检测方法.以angM、tonB、vahl、vah4ClaA、empA、virA、rtxA为靶基因设计特异性引物,结果表明22株病原鳗弧菌均可扩增出empA、vah1、vah4flaA、rtxA、tonB基因目的条带,目的条带大小分别为248bp、493bp、603bp、435bp、441bp及195bp,未扩增出virA和angM基因;以所检出的vah4和rtxA两种毒力基因为靶基因设计的两对特异性引物进行的双重PCR扩增,同一PCR反应体系可扩增出603bp和441bp两条目的条带,且灵敏度为2.4×103CFU/mL,6株对照菌无任何扩增条带;以yah4设计的4条特异引物进行的LAMP扩增,病原鳗弧菌可扩增出阶梯状条带,反应产物加入SYBR GreenⅠ荧光染料后反应液呈现明显的绿色阳性反应,6株对照菌无阶梯状扩增条带且呈现橙色阴性反应,灵敏度为2.4×101CFU/mL,LAMP检测灵敏度是双重PCR的100倍.LAMP技术与PCR比较,操作简便、快速、灵敏性高且不需昂贵仪器,LAMP检测鳗弧菌的方法更适合于养殖生产实际应用.

摘要： 本研究检测了分离自发病大菱鲆、半滑舌鳎及鲤鱼的22株病原鳗弧菌毒力基因的携带情况,并建立了病原鳗弧菌的分子生物学检测方法.以angM、tonB、vahl、vah4ClaA、empA、virA、rtxA为靶基因设计特异性引物,结果表明22株病原鳗弧菌均可扩增出empA、vah1、vah4flaA、rtxA、tonB基因目的条带,目的条带大小分别为248bp、493bp、603bp、435bp、441bp及195bp,未扩增出virA和angM基因;以所检出的vah4和rtxA两种毒力基因为靶基因设计的两对特异性引物进行的双重PCR扩增,同一PCR反应体系可扩增出603bp和441bp两条目的条带,且灵敏度为2.4×103CFU/mL,6株对照菌无任何扩增条带;以yah4设计的4条特异引物进行的LAMP扩增,病原鳗弧菌可扩增出阶梯状条带,反应产物加入SYBR GreenⅠ荧光染料后反应液呈现明显的绿色阳性反应,6株对照菌无阶梯状扩增条带且呈现橙色阴性反应,灵敏度为2.4×101CFU/mL,LAMP检测灵敏度是双重PCR的100倍.LAMP技术与PCR比较,操作简便、快速、灵敏性高且不需昂贵仪器,LAMP检测鳗弧菌的方法更适合于养殖生产实际应用.

摘要： 本研究检测了分离自发病大菱鲆、半滑舌鳎及鲤鱼的22株病原鳗弧菌毒力基因的携带情况,并建立了病原鳗弧菌的分子生物学检测方法.以angM、tonB、vahl、vah4ClaA、empA、virA、rtxA为靶基因设计特异性引物,结果表明22株病原鳗弧菌均可扩增出empA、vah1、vah4flaA、rtxA、tonB基因目的条带,目的条带大小分别为248bp、493bp、603bp、435bp、441bp及195bp,未扩增出virA和angM基因;以所检出的vah4和rtxA两种毒力基因为靶基因设计的两对特异性引物进行的双重PCR扩增,同一PCR反应体系可扩增出603bp和441bp两条目的条带,且灵敏度为2.4×103CFU/mL,6株对照菌无任何扩增条带;以yah4设计的4条特异引物进行的LAMP扩增,病原鳗弧菌可扩增出阶梯状条带,反应产物加入SYBR GreenⅠ荧光染料后反应液呈现明显的绿色阳性反应,6株对照菌无阶梯状扩增条带且呈现橙色阴性反应,灵敏度为2.4×101CFU/mL,LAMP检测灵敏度是双重PCR的100倍.LAMP技术与PCR比较,操作简便、快速、灵敏性高且不需昂贵仪器,LAMP检测鳗弧菌的方法更适合于养殖生产实际应用.

摘要： 本研究检测了分离自发病大菱鲆、半滑舌鳎及鲤鱼的22株病原鳗弧菌毒力基因的携带情况,并建立了病原鳗弧菌的分子生物学检测方法.以angM、tonB、vahl、vah4ClaA、empA、virA、rtxA为靶基因设计特异性引物,结果表明22株病原鳗弧菌均可扩增出empA、vah1、vah4flaA、rtxA、tonB基因目的条带,目的条带大小分别为248bp、493bp、603bp、435bp、441bp及195bp,未扩增出virA和angM基因;以所检出的vah4和rtxA两种毒力基因为靶基因设计的两对特异性引物进行的双重PCR扩增,同一PCR反应体系可扩增出603bp和441bp两条目的条带,且灵敏度为2.4×103CFU/mL,6株对照菌无任何扩增条带;以yah4设计的4条特异引物进行的LAMP扩增,病原鳗弧菌可扩增出阶梯状条带,反应产物加入SYBR GreenⅠ荧光染料后反应液呈现明显的绿色阳性反应,6株对照菌无阶梯状扩增条带且呈现橙色阴性反应,灵敏度为2.4×101CFU/mL,LAMP检测灵敏度是双重PCR的100倍.LAMP技术与PCR比较,操作简便、快速、灵敏性高且不需昂贵仪器,LAMP检测鳗弧菌的方法更适合于养殖生产实际应用.

摘要： 中国小麦花叶病毒（CWMV）是Vigaviridae真菌传棒状病毒属成员，经介体禾谷多黏菌传播。目前环介导的恒温扩增(LAMP)已被应用到马铃薯、番茄、小麦、水稻、桃等多种作物上发生的植物病毒和类病毒的检测。本研究应用在线软件Primer Explorer V4针对CWMV RNA2的ORF3设计了3套LAMP引物。小麦叶片液氮冷冻后研碎，通过水酚抽提LiCI沉淀的方法提取总RNA。一步法RT-LAMP的反应体系参考大麦黄矮病毒的RT-LAMP检测体系并略作调整，使用M-MLV作为反转录酶。扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。首先，在设计的3套引物中只有第1套可以使CWMV病叶RNA扩增出阶梯形状条带，使用其余2套引物扩增时病样与健康样品均无LAMP特征条带出现，说明第1套引物扩增效果较为理想，而其余2套在引物设计中可能存在问题，或者反应条件仍需进一步优化，以后实验均采用第1套引物。随后，以健康叶片RNA、WYMV病叶RNA、CWMV病叶RNA为模板进行RT-LAMP，结果作为对照的健康样品及WYMV病样均不能被扩增产生LAMP特征条带，而CWMV病叶扩增结果正常，说明该引物能够特异地检测CWMV。为了进一步验证RT-LAMP检测的灵敏度，以经10-1～10-6梯度稀释的CWMV病叶RNA为模板进行RT-LAMP，同时以针对于RNA2 0RF3的常规RT-PCR检测作为对照，结果模板经104倍稀释后仍可出现RT-LAMP阶梯条带，而常规RT-PCR的检测极限仅为10-2倍，说明RT-LAMP比常规RT-PCR更为灵敏，这与其他文献报道结果相似。最后，对来自山东、河南、江苏、湖北等地的11份田间样品进行了CWMV RT-LAMP与RT-PCR检测，样品当中只有山东烟台的样品为CWMV阳性，其余均为阴性，RT-LAMP与常规RT-PCR检测结果一致，说明该检测方法切实可行，不需要专门的PCR扩增仪器，可以应用于田间检测。

摘要： 中国小麦花叶病毒（CWMV）是Vigaviridae真菌传棒状病毒属成员，经介体禾谷多黏菌传播。目前环介导的恒温扩增(LAMP)已被应用到马铃薯、番茄、小麦、水稻、桃等多种作物上发生的植物病毒和类病毒的检测。本研究应用在线软件Primer Explorer V4针对CWMV RNA2的ORF3设计了3套LAMP引物。小麦叶片液氮冷冻后研碎，通过水酚抽提LiCI沉淀的方法提取总RNA。一步法RT-LAMP的反应体系参考大麦黄矮病毒的RT-LAMP检测体系并略作调整，使用M-MLV作为反转录酶。扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。首先，在设计的3套引物中只有第1套可以使CWMV病叶RNA扩增出阶梯形状条带，使用其余2套引物扩增时病样与健康样品均无LAMP特征条带出现，说明第1套引物扩增效果较为理想，而其余2套在引物设计中可能存在问题，或者反应条件仍需进一步优化，以后实验均采用第1套引物。随后，以健康叶片RNA、WYMV病叶RNA、CWMV病叶RNA为模板进行RT-LAMP，结果作为对照的健康样品及WYMV病样均不能被扩增产生LAMP特征条带，而CWMV病叶扩增结果正常，说明该引物能够特异地检测CWMV。为了进一步验证RT-LAMP检测的灵敏度，以经10-1～10-6梯度稀释的CWMV病叶RNA为模板进行RT-LAMP，同时以针对于RNA2 0RF3的常规RT-PCR检测作为对照，结果模板经104倍稀释后仍可出现RT-LAMP阶梯条带，而常规RT-PCR的检测极限仅为10-2倍，说明RT-LAMP比常规RT-PCR更为灵敏，这与其他文献报道结果相似。最后，对来自山东、河南、江苏、湖北等地的11份田间样品进行了CWMV RT-LAMP与RT-PCR检测，样品当中只有山东烟台的样品为CWMV阳性，其余均为阴性，RT-LAMP与常规RT-PCR检测结果一致，说明该检测方法切实可行，不需要专门的PCR扩增仪器，可以应用于田间检测。

摘要： 中国小麦花叶病毒（CWMV）是Vigaviridae真菌传棒状病毒属成员，经介体禾谷多黏菌传播。目前环介导的恒温扩增(LAMP)已被应用到马铃薯、番茄、小麦、水稻、桃等多种作物上发生的植物病毒和类病毒的检测。本研究应用在线软件Primer Explorer V4针对CWMV RNA2的ORF3设计了3套LAMP引物。小麦叶片液氮冷冻后研碎，通过水酚抽提LiCI沉淀的方法提取总RNA。一步法RT-LAMP的反应体系参考大麦黄矮病毒的RT-LAMP检测体系并略作调整，使用M-MLV作为反转录酶。扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。首先，在设计的3套引物中只有第1套可以使CWMV病叶RNA扩增出阶梯形状条带，使用其余2套引物扩增时病样与健康样品均无LAMP特征条带出现，说明第1套引物扩增效果较为理想，而其余2套在引物设计中可能存在问题，或者反应条件仍需进一步优化，以后实验均采用第1套引物。随后，以健康叶片RNA、WYMV病叶RNA、CWMV病叶RNA为模板进行RT-LAMP，结果作为对照的健康样品及WYMV病样均不能被扩增产生LAMP特征条带，而CWMV病叶扩增结果正常，说明该引物能够特异地检测CWMV。为了进一步验证RT-LAMP检测的灵敏度，以经10-1～10-6梯度稀释的CWMV病叶RNA为模板进行RT-LAMP，同时以针对于RNA2 0RF3的常规RT-PCR检测作为对照，结果模板经104倍稀释后仍可出现RT-LAMP阶梯条带，而常规RT-PCR的检测极限仅为10-2倍，说明RT-LAMP比常规RT-PCR更为灵敏，这与其他文献报道结果相似。最后，对来自山东、河南、江苏、湖北等地的11份田间样品进行了CWMV RT-LAMP与RT-PCR检测，样品当中只有山东烟台的样品为CWMV阳性，其余均为阴性，RT-LAMP与常规RT-PCR检测结果一致，说明该检测方法切实可行，不需要专门的PCR扩增仪器，可以应用于田间检测。

摘要： 据WHO最新报告显示，乳粉中的阪崎肠杆菌是导致婴幼儿感染和死亡的主要原因之一。FDA于2002年公布了婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌检测的推荐方法，但检测周期长达1周左右，而且操作复杂，难以满足控制该疾病暴发和传播的需要。DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermalamplification，LAMP)技术是一种特异性、灵敏度高、检测时间短的新型基因扩增技术。本文以阪崎肠杆菌为研究对象，建立了一套应用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测方法。针对阪崎肠杆菌16 sRNA基因设计4条引物特异性识别靶基因的六个特殊区域，并在63°C进行恒温扩增。实验结果表明，使用该方法能够在5小时之内检测出复原乳样品中101 CFU/mL的阪崎肠杆菌。灵敏度可以达到100 fg阪崎肠杆菌基因组DNA。应用环介导等温扩增法，克服了传统检测周期长、操作复杂的缺点，不仅能够用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的检测，而且满足了对于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测的迫切需要。

摘要： 据WHO最新报告显示，乳粉中的阪崎肠杆菌是导致婴幼儿感染和死亡的主要原因之一。FDA于2002年公布了婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌检测的推荐方法，但检测周期长达1周左右，而且操作复杂，难以满足控制该疾病暴发和传播的需要。DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermalamplification，LAMP)技术是一种特异性、灵敏度高、检测时间短的新型基因扩增技术。本文以阪崎肠杆菌为研究对象，建立了一套应用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测方法。针对阪崎肠杆菌16 sRNA基因设计4条引物特异性识别靶基因的六个特殊区域，并在63°C进行恒温扩增。实验结果表明，使用该方法能够在5小时之内检测出复原乳样品中101 CFU/mL的阪崎肠杆菌。灵敏度可以达到100 fg阪崎肠杆菌基因组DNA。应用环介导等温扩增法，克服了传统检测周期长、操作复杂的缺点，不仅能够用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的检测，而且满足了对于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测的迫切需要。

摘要： 本发明公开了一种环介导恒温检测苎麻疫霉菌引物及其检测方法，所述的引物由F3、B3、FIP和BIP 4条特异性引物组成，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑4所示。所述方法包括：提取待测样品DNA，以DNA为模板，采用所述引物进行LAMP扩增，观察LAMP产物的颜色，根据LAMP产物颜色对样品进行判断分析。本发明的引物特异性好、灵敏度高，建立的LAMP方法可快速、准确检测苎麻疫霉菌，适宜病原菌和病害的现场检测，易于大范围推广应用，为防治苎麻疫霉菌引起病害提供可靠的技术和理论依据。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种恒温环介导试验检测志贺氏菌的引物组，内引物FIP/BIP和外引物F3/B3，检测方法包括以下步骤：首先提取待测菌的基因组DNA，再以提取的基因组DNA为模板进行LAMP扩增，然后对扩增产物进行检测，通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在志贺氏菌，试剂盒包括还包括Bst DNA聚合酶缓冲液、Bst DNA聚合酶、dNTPs、MgSO4和Betaine，所述快速检测志贺氏菌的LAMP引物组具有高灵敏度和高特异性，检测时间短，结果判定简单，操作便捷，成本低的优点。

摘要： 本发明公开了一种结合南极热敏尿嘧啶脱氧核酸糖基化酶(AUDG)和自避分子识别系统(SAMRS)的环介导恒温扩增方法，所述方法对环介导恒温扩增中的引物3’端倒数第二位碱基至倒数第五位碱基的4个碱基进行SAMRS修饰，并在引物LF的5’端标记半抗原，在扩增系统中引入AUDG酶、脱氧尿嘧啶和生物素化的脱氧胞嘧啶，以环介导恒温扩增技术为基础，结合高分子纳米生物传感检测扩增产物。所述方法针对结核分枝杆菌复合群的IS6110特异序列的扩增产物能被高分子纳米生物传感器可视化检测。所述方法便捷、快速、敏感、特异，适宜于各种核苷酸片段检测。

摘要： 本发明公开了一种基于颜色判定的逆转录环介导恒温扩增快速检测SARS‑COV‑2的试剂盒，其基于逆转录环介导恒温扩增(RT‑LAMP)反应扩增SARS‑COV‑2的N基因和/或orf1ab基因，配合pH指示剂，标识扩增反应体系中的pH变化，可通过颜色变化判断对应基因的扩增与否，从而实现对SARS‑COV‑2的快速、低成本检测。

摘要： 本发明提供了一种基于双重环介导恒温扩增技术检测新型冠状病毒的引物，包括第一引物组和第二引物组，第一引物组包括SEQ ID.NO.3～4所示的第一内引物对、SEQ ID.NO.5～6所示的第一外引物对、SEQ ID.NO.7～8所示的第一环引物对；第二引物组包括SEQ ID.NO.9～10所示的第二内引物对、SEQ ID.NO.11～12所示的第二外引物对、SEQ ID.NO.13‑SEQ ID.NO.14所示的第二环引物对。所述第一引物组和第二引物组分别能快速、特异性地扩增新型冠状病毒的不同靶标基因。本发明还提供了检测新型冠状病毒的探针、试剂盒及方法。

摘要： 本发明提供了一种基于环介导恒温扩增技术检测B族链球菌的引物组，包括SEQ ID NO：1～2所示的内引物对、SEQ ID NO：3～4所示的外引物对和SEQ ID NO：5～6所示的环引物对。本发明还提供了一种基于环介导恒温扩增技术检测B族链球菌的试剂盒及检测方法。所述引物组能快速、特异性地扩增B族链球菌的靶标基因；所述试剂盒能对B族链球菌基因进行快速的定性检测；所建立的检测方法具有操作简便、检测时间短、检测准确性、灵敏度高等优点。

摘要： 本发明提供了一种基于双重环介导恒温扩增技术检测甲流和乙流病毒的引物，包括可扩增甲型流感病毒的第一引物组和可扩增乙型流感病毒的第二引物组，第一引物组包括SEQ ID.NO.3～4所示的第一内引物对、SEQ ID.NO.5～6所示的第一外引物对、SEQ ID.NO.7～8所示的第一环引物对；第二引物组包括SEQ ID.NO.9～10所示的第二内引物对、SEQ ID.NO.11～12所示的第二外引物对、SEQ ID.NO.13‑SEQ ID.NO.14所示的第二环引物对。所述引物能避免同一反应体系存在多组引物带来的引物与靶标的非特异性结合。本发明还提供了检测甲流和乙流病毒的探针、试剂盒及方法。

摘要： 本发明公开了一种基于环介导恒温扩增和微流控芯片生殖道支原体检测方法，属于病原体检测和诊断技术领域。包括以下步骤：引物设计;微流控芯片制作;恒温扩增反应体系配制;芯片加样;核酸扩增和结果判读。本发明采用恒温扩增技术和微流控芯片技术，利用具有链置换功能的聚合酶在63°C恒温条件下进行反应，使用荧光染料掺入法进行实时荧光检测，扩增阳性的样品会产生类似实时荧光的“S”形扩增曲线。成功制备的四种生殖道支原体的微流控芯片具有较好的灵敏度、特异性和准确性，整个检测过程在1h内即可完成。Uu、Mg、Mh的最低检测限为1000拷贝/μL，而Up的最低检测限为5000拷贝/μL,在临床上具有广泛的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种环介导恒温扩增结合高分子纳米生物传感检测肺炎支原体特异基因P1的方法，本发明还提供了用于上述扩增的一组引物序列。所述方法在环介导恒温扩增中的内引物FIP的5’端标记荧光素(FITC)，在环引物LF的5’端标记生物素(biotin)，所述方法针对肺炎支原体特异基因P1的扩增产物能被纳米生物传感器可视化检测。所述方法便捷、快速、敏感、特异，灵敏度范围为60ng～600fg，并能准确地鉴别肺炎支原体，具有优异的特异性。

摘要： 本发明公开了一种结合南极热敏尿嘧啶脱氧核酸糖基化酶(AUDG)和自避分子识别系统(SAMRS)的环介导恒温扩增方法，所述方法对环介导恒温扩增中的引物3’端倒数第二位碱基至倒数第五位碱基的4个碱基进行SAMRS修饰，并在引物LF的5’端标记半抗原，在扩增系统中引入AUDG酶、脱氧尿嘧啶和生物素化的脱氧胞嘧啶，以环介导恒温扩增技术为基础，结合高分子纳米生物传感检测扩增产物。所述方法针对结核分枝杆菌复合群的IS6110特异序列的扩增产物能被高分子纳米生物传感器可视化检测。所述方法便捷、快速、敏感、特异，适宜于各种核苷酸片段检测。