大肠杆菌O157

摘要： 益生菌可在肠道定植从而发挥抗炎或抗氧化活性,有利于宿主肠道健康。本实验研究了从新疆传统发酵乳制品中分离得到的8株植物乳杆菌对大肠杆菌侵袭和过氧化氢刺激肠上皮细胞HT-29的保护作用。结果表明:在8株植物乳杆菌中,植物乳杆菌35具有最高的黏附能力。植物乳杆菌35可通过取代、竞争、排阻的方式抑制大肠杆菌对HT-29细胞的黏附,抑制率分别为42.60%、59.17%、60.19%。植物乳杆菌35及其多糖可抑制大肠杆菌刺激HT-29细胞产生白细胞介素-8;同时保护HT-29细胞免受过氧化氢的损伤,增加超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力水平并降低丙二醛含量。结论:植物乳杆菌35及其粗胞外多糖具有抑制大肠杆菌O157诱导的炎症性肠病的潜力。

摘要： 旨在测定此前从断奶前仔猪粪样中分离得到的1株大肠杆菌噬菌体C6在致病性大肠杆菌上的生物学特性,并比较该噬菌体在不同致病菌上的感染特性。利用电镜形态观察和基因组测序确定其分类,用点滴法和双层平板法测定其在致病性大肠杆菌上的宿主谱,通过噬菌斑形态、最佳感染复数(MOI)、成斑率(EOP)、吸附率、一步生长曲线以及抑菌曲线等来评价噬菌体在多株致病菌上的感染特性。结果显示:噬菌体C6可感染1株非致病性大肠杆菌和4株致病性大肠杆菌,包括大肠杆菌O157(E.coli W1)、2株产志贺毒素大肠杆菌(STEC W3、STEC W5)和1株肠致病性大肠杆菌(EPEC 143)。通过比较噬菌体C6在4株致病菌上的各项感染特性指标发现:噬菌斑大小和成斑率E.coli W1>EPEC 143>STEC W3>STEC W5;吸附率E.coli W1>EPEC 143、STEC W3、STEC W5;最佳MOI EPEC 143、STEC W3、STEC W5>E.coli W1;液体LB中生长能力和抑菌能力E.coli W1>STEC W3>EPEC 143、STEC W5。噬菌体C6为T4样噬菌体,可感染多株致病性大肠杆菌,在不同致病菌上的感染特性存在差异,但均能显著抑制致病菌的生长。

摘要： 建立一种的对病原菌大肠杆菌O157的比色生物传感器检测方法。特异性识别大肠杆菌O157抗体的磁珠作为识别及富集元件,功能性葡萄糖氧化酶纳米花作为信号输出方式,形成“抗体-靶标-纳米花”三明治夹心结构,通过可视化过氧化氢试纸条进行定量定性分析。在10~106 CFU·mL^(-1)检测大肠杆菌O157具有良好的线性关系,最低检测限(LOD)为10 CFU·mL^(-1),实际样品回收率可达93%~102%,符合国家食品理化检测的检测方法确认的技术要求中的加标检测回收率范围,且具有良好特异性。成功建立了一种定性定量的可视化比色传感器用于病原菌大肠杆菌O157的检测,灵敏度可达10 CFU·mL^(-1),与传统病原菌的检测方法相比,具有可视化、操作简便、灵敏性高的优点。

摘要： 大肠杆菌O157:H7是一种常见的能严重威胁公共卫生安全的食源性致病菌,噬菌体及其内溶酶、穿孔素是新型的抑菌剂.该文利用十聚体寡核苷酸随机引物初步鉴定了噬菌体EC-p9;应用PCR技术获得该噬菌体的内溶酶Lys 9和穿孔素Hol 9的基因;利用生物学信息预测了这2种蛋白的特性;通过大肠杆菌表达体系表达了这2种蛋白.结果表明,噬菌体EC-p9是dsDNA肌尾科噬菌体,具有"穿孔素-内溶酶"裂解体系.内溶酶Lys 9是一种不含跨膜结构的肽聚糖水解酶.穿孔素Hol 9是Ⅲ型穿孔素,仅有1个跨膜结构.内溶酶Lys 9和穿孔素Hol 9都能通过大肠杆菌表达体系成功表达,但穿孔素Hol 9的表达会对大肠杆菌BL21(DE3)产生毒害作用,导致表达量较少.最终获得了质量浓度为2.49 g/L的内溶酶Lys 9和0.95 g/L的穿孔素Hol 9.该研究为开展内溶酶Lys 9和穿孔素Hol 9的抑菌能力以及噬菌体EC-p9的裂解体系的研究奠定了基础.

摘要： 为了分析不同检验方法的优缺点,提高对食源性致病菌的检测能力,本文参照英国食品分析实验室质量评估体系(FAPAS)实验室提供的大肠杆菌O157:H7检测作业指导书和GB 4789.36-2016第二法免疫磁珠捕获法对2份样品进行检测, 并采用VIDAS 30全自动酶联免疫分析系统和VITEK 2 Compact全自动微生物快速检测分析系统进行检验分析.结果显示,样品编号为M247d11A检出O157:H7,M247d11B未检出O157:H7.由此可知,免疫磁珠法检测大肠杆菌O157:H7相对于常规培养法具有灵敏度高、稳定、准确等优势,在检测中可选择该法并结合VIDAS 30和VITEK 2 Compact进行检测,使结果更加准确.

摘要： 建立反转录环介导等温扩增(Reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification RT-LAMP)方法特异性检测大肠杆菌O157.针对大肠杆菌O157的特异性保守rfbE基因设计多组引物,通过对引物筛选和反应条件优化,建立了检测大肠杆菌O157的实时荧光RT-LAMP方法.利用大肠杆菌O157及其人工污染脱脂乳样品,研究了方法的特异性和灵敏度,并与rRT-PCR(Real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)方法的灵敏度进行比较.结果显示,等温65°C条件下,30 min内能完成RT-LAMP扩增反应.所建立的实时荧光RT-LAMP方法特异性强,除了2株大肠杆菌O157以外其余菌株均未产生特异性扩增反应.同时该方法灵敏度高,对人工污染脱脂乳样品检测灵敏度能达到20 CFU/g,比rRT-PCR方法高10倍.建立的实时荧光RT-LAMP方法将为大肠杆菌O157现场快速检测提供有力手段.

摘要： 目的 建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)快速检测大肠杆菌(Escherichia coli,EHEC)O157的分析方法.方法 针对大肠杆菌O157编码O抗原的rfbE基因设计引物.对该方法进行特异性验证,同时对大肠杆菌O157∶H7纯培养物的灵敏度和人工污染牛肉的检出限进行测定,对61份牛肉样品进行RF-LAMP检测,并与GB 4789.36-2016方法进行比较,评价RF-LAMP方法的敏感性、特异性和准确度.结果 10株大肠杆菌O157呈阳性结果,21株非大肠杆菌O157呈阴性结果,该方法特异性良好.纯培养物检测的灵敏度为5.1 CFU/mL,人工污染的牛肉样品的检出限为5.1 CFU/g.结论 本研究建立的RF-LAMP技术特异性好、灵敏度高、操作简单,可实时监测扩增反应,避免了繁琐的电泳过程,实现了对大肠杆菌O157的快速检测,对大肠杆菌O157引起的食源性疾病的预防和控制具有重要意义.

摘要： 初步调查分析屠宰环节529份牛羊产品中大肠杆菌O157污染状况,同时对分离出的16株大肠杆菌O157进行药敏试验和致病性分析.结果表明,大型屠宰场的牛羊产品受大肠杆菌O157污染程度较重为4.42％,手工屠宰场比机械屠宰场污染程度重,为4.27％,西北方向比西南方向污染重,达到5.08％,羊产品比牛产品污染重,为5.91％,出场前胴体拭子比刚宰出的污染重,达到5.84％.16株分离菌株对常见抗生素均敏感,且这些菌株都存在肠溶血素(ehxA基因)、紧密素(eaeA基因)和+93 uidA毒力基因,志贺毒素(Stx1)均缺失和志贺毒素(Stx2)部分缺失.

摘要： The purpose of this experiment is to solve the volatile,instability and poor water solubility of TTO,expanding its application range as food antibacterial additives.This experiment prepared the TTO/β-CD inclusion complexes using saturated aqueous solution method,and then employed the thin film dispersion-ultrasonic method to produce nanoliposomes encapsulated TTO/β-CD complexes.The optimal particle size (365 nm),PDI (0.249),Zeta potential (-36.0mV)and entrapment efficiency (59.71％) of nanoliposomes were obtained at the concentration of 20 mg/mL TTO/β-CD inclusion complexes.This method significantly improved the stability and water solubility of TTO and its entrapment efficiency in nanoliposomes.The results of antibacterial experiment indicated that TTO/β-CD nanoliposomes in beef had desired antibacterial activity against E.coli O157:H7,and did not affect the quality of beef.In conclusion,the embedding effect of β-CD can significantly improve the stability and solubility of the TTO and its encapsulation efficiency in nanoliposomes,and thus,TO/β-CD nanoliposomes has a good application prospect in meat products preservation.%目的:克服茶树油(TTO)易挥发不稳定、水溶性差的缺点,拓展其在食品抗菌添加剂中的应用范围.方法:首先采用饱和水溶液法制得TTO/β-CD包合物,再通过薄膜-超声分散法将包合物包埋进纳米脂质体中.结果:当体系中TTO/β-CD包合物的浓度为20 mg/mL时,制备得到的纳米脂质体具有最佳的稳定性和包封率(平均粒径为365 nm,PDI为0.249,Zeta电位为-36.0 mV,包封率为59.71％).抗菌实验显示TTO/β-CD纳米脂质体在牛肉中对大肠杆菌O157具有显著的抗菌效果,且不会影响牛肉的感官品质.结论:通过β-环糊精包埋可以显著提TTO的稳定性、水溶性及其在纳米脂质体中的包封率,因此TTO/β-CD纳米脂质体在肉制品的抗菌保鲜中具有广阔的应用前景.

摘要： 目的 研究大肠杆菌O157快速检测板在肉与肉制品检测中的应用.方法 以GB/T 4789.36-2008《食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌O157∶H7/NM检验》作为参考方法,研究大肠杆菌O157快速检测板在肉与肉制品检测中应用的灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率、准确度等指标,同时利用卡方检验分析阳性率显著性差异.结果 大肠杆菌O157快速检测板灵敏度为100％,不存在假阴性,特异性为96.4％,假阳性率为3.6％,准确度为98％,显著性差异卡方值卡x2为0,均达到定性方法验证的相关指标.结论 大肠杆菌O157检测板技术具有快速准确、灵敏度高、操作简单的特点,可以作为一种快速筛查方法广泛应用于肉与肉制品大肠杆菌O157的检测.%Objective To evaluate the application value of rapid petri-dish in the detection of Escherichia coli O157 in meat and meat products.Methods The sensitivity,specificity,false positive rate,false negative rate and accuracy ofE.coli O157 rapid petri-dish in detection of meat and meat products were investigated by using national standard GB/T 4789.36-2008 Microbiological examination of food hygiene examination E.coli O157∶H7/NM.Meanwhile,the significant difference of positive rates was analyzed by the chi-square.Results The sensitivity of E.coli O157 petri-dish was 100％,the false negative rate was 0,the specificity was 96.4％,the false positive rate was 3.6％,the accuracy rate was 98％,and the chi-square (X2) was 0.The results showed that all parameters conformed to the requirements of qualitative methods validation.Conclusion It is feasible to detect E.coli O157 by the rapid petri-dish as a rapid screening method for its speediness,accuracy,high sensitivity and easy operation.

摘要： 以大肠杆菌O157rFBE和sir2为待检靶基因，设计两对引物和两条MGB探针，rfbE和six2探针5’端分别用FAM和VIC基团标记，3’端均用Taqman-MGB标记。建立并优化了检测大肠杆菌O157的二重荧光定量PCR方法，可检测的最低DNA浓度是101拷贝/uL；试验中O157菌株检测结果均为rfbE阳性，而非O157菌株检测结果均为阴性；重复性实验中，批间差异小于80％，批内差异小于70％。实验结果显示此二重荧光定量PCR方法可对分离的可疑大肠杆菌O157菌株进行快速鉴定,同时得知菌株是否携带six2毒力基因，有利于菌株毒力强弱的判定。

摘要： 以大肠杆菌O157rFBE和sir2为待检靶基因，设计两对引物和两条MGB探针，rfbE和six2探针5’端分别用FAM和VIC基团标记，3’端均用Taqman-MGB标记。建立并优化了检测大肠杆菌O157的二重荧光定量PCR方法，可检测的最低DNA浓度是101拷贝/uL；试验中O157菌株检测结果均为rfbE阳性，而非O157菌株检测结果均为阴性；重复性实验中，批间差异小于80％，批内差异小于70％。实验结果显示此二重荧光定量PCR方法可对分离的可疑大肠杆菌O157菌株进行快速鉴定,同时得知菌株是否携带six2毒力基因，有利于菌株毒力强弱的判定。

摘要： 以大肠杆菌O157rFBE和sir2为待检靶基因，设计两对引物和两条MGB探针，rfbE和six2探针5’端分别用FAM和VIC基团标记，3’端均用Taqman-MGB标记。建立并优化了检测大肠杆菌O157的二重荧光定量PCR方法，可检测的最低DNA浓度是101拷贝/uL；试验中O157菌株检测结果均为rfbE阳性，而非O157菌株检测结果均为阴性；重复性实验中，批间差异小于80％，批内差异小于70％。实验结果显示此二重荧光定量PCR方法可对分离的可疑大肠杆菌O157菌株进行快速鉴定,同时得知菌株是否携带six2毒力基因，有利于菌株毒力强弱的判定。

摘要： 以大肠杆菌O157rFBE和sir2为待检靶基因，设计两对引物和两条MGB探针，rfbE和six2探针5’端分别用FAM和VIC基团标记，3’端均用Taqman-MGB标记。建立并优化了检测大肠杆菌O157的二重荧光定量PCR方法，可检测的最低DNA浓度是101拷贝/uL；试验中O157菌株检测结果均为rfbE阳性，而非O157菌株检测结果均为阴性；重复性实验中，批间差异小于80％，批内差异小于70％。实验结果显示此二重荧光定量PCR方法可对分离的可疑大肠杆菌O157菌株进行快速鉴定,同时得知菌株是否携带six2毒力基因，有利于菌株毒力强弱的判定。

摘要： 以大肠杆菌O157rFBE和sir2为待检靶基因，设计两对引物和两条MGB探针，rfbE和six2探针5’端分别用FAM和VIC基团标记，3’端均用Taqman-MGB标记。建立并优化了检测大肠杆菌O157的二重荧光定量PCR方法，可检测的最低DNA浓度是101拷贝/uL；试验中O157菌株检测结果均为rfbE阳性，而非O157菌株检测结果均为阴性；重复性实验中，批间差异小于80％，批内差异小于70％。实验结果显示此二重荧光定量PCR方法可对分离的可疑大肠杆菌O157菌株进行快速鉴定,同时得知菌株是否携带six2毒力基因，有利于菌株毒力强弱的判定。

摘要： 【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导，以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑，并采用PCR的方法对噬菌体进行鉴定。同时测定8株溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉索C诱导前以及诱导8h、12h、16h四个阶段滤液中Stx毒素的表达量，毒素表达量采用WSI-1细胞毒性检测试剂盒检测Vero细胞存活率。【结果】试验结果显示溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导后释放大量的Stx噬菌体颗粒。同时诱导后Stx毒素的表达量显著也增加，且随着诱导时间的延长毒素的表达量继续增加，但增加的幅度逐渐减缓。【结论】本研究确定了丝裂霉素C可以诱导溶原性大肠杆菌O157释放Stx噬菌体，同时也增加了Stx毒素的表达，从而增强细菌的毒力。

摘要： 【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导，以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑，并采用PCR的方法对噬菌体进行鉴定。同时测定8株溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉索C诱导前以及诱导8h、12h、16h四个阶段滤液中Stx毒素的表达量，毒素表达量采用WSI-1细胞毒性检测试剂盒检测Vero细胞存活率。【结果】试验结果显示溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导后释放大量的Stx噬菌体颗粒。同时诱导后Stx毒素的表达量显著也增加，且随着诱导时间的延长毒素的表达量继续增加，但增加的幅度逐渐减缓。【结论】本研究确定了丝裂霉素C可以诱导溶原性大肠杆菌O157释放Stx噬菌体，同时也增加了Stx毒素的表达，从而增强细菌的毒力。

摘要： 【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导，以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑，并采用PCR的方法对噬菌体进行鉴定。同时测定8株溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉索C诱导前以及诱导8h、12h、16h四个阶段滤液中Stx毒素的表达量，毒素表达量采用WSI-1细胞毒性检测试剂盒检测Vero细胞存活率。【结果】试验结果显示溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导后释放大量的Stx噬菌体颗粒。同时诱导后Stx毒素的表达量显著也增加，且随着诱导时间的延长毒素的表达量继续增加，但增加的幅度逐渐减缓。【结论】本研究确定了丝裂霉素C可以诱导溶原性大肠杆菌O157释放Stx噬菌体，同时也增加了Stx毒素的表达，从而增强细菌的毒力。

摘要： 【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导，以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑，并采用PCR的方法对噬菌体进行鉴定。同时测定8株溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉索C诱导前以及诱导8h、12h、16h四个阶段滤液中Stx毒素的表达量，毒素表达量采用WSI-1细胞毒性检测试剂盒检测Vero细胞存活率。【结果】试验结果显示溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导后释放大量的Stx噬菌体颗粒。同时诱导后Stx毒素的表达量显著也增加，且随着诱导时间的延长毒素的表达量继续增加，但增加的幅度逐渐减缓。【结论】本研究确定了丝裂霉素C可以诱导溶原性大肠杆菌O157释放Stx噬菌体，同时也增加了Stx毒素的表达，从而增强细菌的毒力。

摘要： 【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导，以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑，并采用PCR的方法对噬菌体进行鉴定。同时测定8株溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉索C诱导前以及诱导8h、12h、16h四个阶段滤液中Stx毒素的表达量，毒素表达量采用WSI-1细胞毒性检测试剂盒检测Vero细胞存活率。【结果】试验结果显示溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导后释放大量的Stx噬菌体颗粒。同时诱导后Stx毒素的表达量显著也增加，且随着诱导时间的延长毒素的表达量继续增加，但增加的幅度逐渐减缓。【结论】本研究确定了丝裂霉素C可以诱导溶原性大肠杆菌O157释放Stx噬菌体，同时也增加了Stx毒素的表达，从而增强细菌的毒力。

摘要： 本发明公开了一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途。涉及构建合成致新生婴儿脑膜炎大肠杆菌O1血清型糖蛋白结合疫苗细胞工厂的方法。它是利用酿酒酵母高效的同源重组效率，基于DNA Assembler的方法，构建O1抗原合成基因簇质粒。在大肠杆菌JM109中转化O1抗原合成基因簇穿梭质粒，通过脂多糖提取，凝胶电泳和银染鉴定质粒；在FLP‑FRT辅助下删除JM109中的waaL和wecA，排除原始不完整O抗原的干扰。改造pET28a(+)质粒，经诱导，合成糖蛋白结合疫苗，借助于AKTA Primeplus蛋白纯化工作站纯化糖蛋白并通过western‑blotting鉴定该糖蛋白。本发明构建的重组大肠杆菌为生物法合成糖蛋白结合疫苗提供了新的思路。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌菌株的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑COP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12662BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明公开了一种用于对溶液中大肠杆菌浓度检测的传感器的制作方法，制备了一种基于石墨烯的1‑氨基芘和麦芽糖的复合膜，通过嫁接刀豆凝聚素A制成对糖类具有敏感性的改性石墨烯复合膜，并将其涂敷在光纤上制成基于改性石墨烯复合敏感膜涂敷粗锥型的生物传感器。其不仅制作简单容易，另外通过此方法制得的传感器在对溶液中大肠杆菌浓度的检测中，具有灵敏度高、检测效果好，响应时间快，精度和可靠性高的优点。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死肠致病性大肠杆菌的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑CHP‑2，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12661BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗肠致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种从自然中分离的肌病毒科噬菌体Esc‑COP‑7(受托编号：KCTC 13130BP)，其特征在于，携带具有特异性杀灭大肠杆菌能力、并用序列号1标记的基因组，且本发明还涉及利用以所述噬菌体为有效成分包含在内的组合物防止及治疗致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种从自然中分离的长尾病毒科噬菌体Esc‑COP‑9(受托编号：KCTC 13131BP)，其特征在于，携带具有特异性杀灭大肠杆菌能力、并用序列号1标记的基因组，且本发明还涉及利用以所述噬菌体为有效成分包含在内的组合物防止及治疗致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明提供了一种使大肠杆菌获得有效NHEJ系统的高通量筛选工具在大肠杆菌基因编辑中的应用，所述使大肠杆菌获得有效NHEJ系统的高通量筛选工具包括：pDual‑Cas9‑Parental质粒载体：含有DNA解旋酶基因、复制子、抗生素抗性基因、核酸酶基因、araC基因、阿拉伯糖启动子和Ⅱs型限制酶识别位点；和pDual‑sgRNA‑lacZ质粒载体：含有靶向lacZ基因的sgRNA序列、组成型表达的强启动子、复制子和抗生素抗性基因。本发明筛选得到的NHEJ系统在大肠杆菌中具有良好的连接效率，并可以进行高效的基因编辑，应用前景广阔。

摘要： 本发明提供了一种大肠杆菌重组核酸、重组大肠杆菌及培养方法和生物合成L‑苏氨酸的方法，涉及生物工程技术领域。本发明所述大肠杆菌重组核酸，利用磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶pck的编码基因、丙酮酸羧化酶pyc的编码基因和苏氨酸操纵子的编码基因对大肠杆菌进行改造，获得一株以葡萄糖为底物的重组大肠杆菌LMT4，利用所述LMT4进行发酵生产，L‑苏氨酸产量以及转化率明显提高，为L‑苏氨酸的工业化生产奠定基础。

摘要： 本发明提供了大肠杆菌重组菌及利用大肠杆菌重组菌生产3,4‑二羟基苯乙醇的方法，大肠杆菌重组菌共表达四种酶，分别为酪氨酸酶、L‑氨基酸氧化酶、酮酸脱羧酶和醇脱氢酶；利用大肠杆菌重组菌，以酪氨酸为底物生产3,4‑二羟基苯乙醇。本发明以酪氨酸为底物，酪氨酸廉价易得，且大多数为生物基来源，不依赖于石化产品，属于可再生资源，此外，由于它的天然属性，在食品、保健品、化妆品领域更易于被消费者认可接受。

摘要： 本发明公开了一种在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒及其构建方法。所述的穿梭质粒是基于细菌‑酵母人工染色体，从pGEN‑MCS质粒上通过PCR扩增得到hok‑sok和par元件，然后通过连接将稳定遗传元件hok‑sok和parA构建入细菌‑酵母人工染色体中，进而获得方便克隆长片段DNA、无抗性且在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒。优选的，所述的穿梭质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的穿梭质粒载体，不但可实现酵母、细菌内穿梭，可在酵母中通过同源重组进行多片段DNA组装，还可以稳定的在大肠杆菌中复制、遗传，便于进行DNA提取。