鹦鹉热衣原体real-time quantitative PCR检测方法的研究

摘要

[目的]为鹦鹉热衣原体的快速、准确检测奠定基础.[方法]根据鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因序列设计一对特异性引物,以SYBR GreenI为荧光染料,建立了鹦鹉热衣原体Real-time quantitative PCR检测方法.根据检测结果,计算样品的批内和批间变异系数(CV).[结果]以提取的鹦鹉热表原体DNA为模板,用引物Cps-1和Cps-2进行PCR扩增,得到长100 bp的片段.扩增产物回收纯化后,连接到pGEM-T Easy载体上并转化到大肠杆菌DH5α,菌落PCR检测筛选阳性克隆,培养后提取质粒DNA.当模板浓度范围为1.78×102～1.78×108拷贝/μl时,标准曲线相关系数达0.998;批内和批间变异系数(CV%)分别为1.30%～4.59%和5.72%～9.87%.[结论]为鹦鹉热衣原体的感染、流行调查等提供了重要的技术参考.