深圳地区人乳头瘤病毒18型E6E7基因的克隆、序列分析及E6/E7融合基因的构建

摘要

目的 克隆人乳头瘤病毒18型E6E7基因序列,构建E6/E7融合基因,为HPV治疗性疫苗的研制打下基础.方法 采用PCR技术扩增1例HPV18阳性患者组织中HPV18 E6E7基因.将PCR产物回收,插入pSC-A质粒载体构建pSC-A/HPV18 E6E7重组质粒并进行核酸限制性内切酶鉴定及DNA测序分析;通过点突变方法使HPVl8 E6、E7基因的开放读码框(ORF)融合以简化后续的基因表达问题.结果 成功构建了pSC-A/HPV18E6E7重组质粒,测序分析表明克隆的HPV18 E6E7基因与GenBank收录的德国株(AY262282)完全一致,点突变成功使E6基因的终止密码子突变,使HPV18 E6、E7基因融合.结论 本研究获得了正确的 HPV18 E6E7基因,为其重组表达及其相关研究奠定了良好基础.