点突变

摘要： Molecular Cell|组蛋白H3.3 K27M和K36M突变通过破坏染色体修饰之间的拮抗作用影响发育编码组蛋白变体H3.3基因发生点突变是多种癌症发生的原因之一,其中最典型的是第27位(H3.3K27M)和36位赖氨酸被蛋氨酸所取代(H3.3K36M)。这两种突变通过抑制对应组蛋白甲基转移酶的活性调控肿瘤发生。然而,H3.3K27M和H3.3K36M突变是否通过调控组蛋白甲基化来调控个体发育尚不清楚。

摘要： 目的·建立由激活诱导胞苷脱氨酶(activation-induced cytidine deaminase,AID)引起的体细胞高频突变过程中,快速检测抗体基因可变(variable,V)、多样(diversity,D)、连接(joining,J)区发生突变(包括点突变、插入和缺失事件)的体外方法。应用该方法检测经2种DNA聚合酶β(polymeraseβ,Polβ)抑制剂处理的细胞中抗体基因VDJ片段的突变情况。方法·用慢病毒感染法处理CH12F3细胞(即处理组),感染前的CH12F3细胞为对照组。采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测2组细胞中AID的表达水平。构建高通量测序文库,应用生物信息学的方法分析处理组和对照组细胞中抗体基因VDJ片段的点突变、插入及缺失频率。采用不同浓度的Polβ抑制剂[扎西他滨(2’,3’-dideoxycytidine,DDC)、5-甲氧基黄铜(5-methoxyflavone,5-MF)]处理CH12F3细胞,并采用台盼蓝拒染法测定该2种抑制剂对细胞增殖的影响。分别以筛选得到的DDC浓度、5-MF浓度处理CH12F3细胞(即实验组),以0.9%NaCl处理的细胞及DMSO处理的细胞依次记为上述实验组的对照组,使用上述已建立的方法进行处理,最终行高通量测序,分析该2种抑制剂对抗体基因VDJ片段中点突变、插入及缺失频率的影响。结果·Western blotting结果显示,和CH12F3细胞对照组相比,CH12F3细胞处理组中AID表达较高;且高通量测序结果显示,该组在抗体基因VDJ片段上存在大量的点突变,且插入和缺失的频率均较高(均P=0.000)。台盼蓝拒染法检测显示,处理CH12F3细胞最适宜的DDC浓度为100μmol/L、5-MF浓度为25μmol/L。最终的高通量测序结果显示,和0.9%NaCl对照组相比,经100μmol/L DDC处理的细胞在抗体基因VDJ片段的点突变频率较低(P=0.000),长度为1 bp的缺失频率亦较低(P=0.009);和DMSO对照组相比,经25μmol/L 5-MF处理的细胞在抗体基因VDJ片段的点突变频率较低(P=0.000),长度大于1 bp的插入和缺失频率亦有所下降(均P=0.000)。结论·该研究建立的体外检测方法可用于分析AID引起的抗体基因VDJ片段的突变事件。Polβ抑制剂DDC和5-MF对由AID引起的抗体基因VDJ片段的突变事件具有抑制作用。

摘要： Phe511是禾谷镰孢甾醇-14α-脱甲基酶FgCYP51B活性口袋中的一个重要氨基酸。本研究中,我们探究了FgCYP51B蛋白中该位点突变后对禾谷镰孢主要生物学表型的影响,并通过分子对接探讨了可能的原因。结果表明禾谷镰孢FgCYP51B-F511L突变体在菌落形态、生长速率等表型上与野生型菌株PH-1没有明显差异。但是F511L突变导致分生孢子的产量严重降低,对烯唑醇的敏感性增强。分子对接发现突变后亮氨酸的长侧链使得烯唑醇的甲基发生扭转,侧链朝向发生改变,更有利于与蛋白受体形成较强的疏水作用,这可能是导致FgCYP51B-F511L突变体对烯唑醇敏感性增强的原因。

摘要： 有机磷水解酶是一种能够有效水解有机磷酸酯类化合物的酯酶,天然含有机磷水解酶的生物体中分离的有机磷水解酶存在水解速率较慢、产量低、提纯复杂等问题。本文通过枯草芽孢杆菌分泌表达有机磷水解酶,提高有机磷水解酶产量。同时对有机磷水解酶基因进行点突变,构建了H254R-H257Y-L303T三位点联合突变的突变体,用联苯胺定量法比较野生型和突变体水解神经性毒剂沙林的能力。结果表明,该枯草芽孢杆菌表达体系能够稳定分泌表达有机磷水解酶,野生型有机磷水解酶水解沙林的活性为0.407 mg/(min·mg),含有突变体的活性为0.790 mg/(min·mg),较野生型有机磷水解酶提升了94.1%,水解能力显著增强。通过BIOVIA软件模拟有机磷水解酶结构,发现突变体稳定性优于野生型有机磷水解酶。本枯草芽孢杆菌表达体系能够稳定分泌表达有机磷水解酶,具有较好的生物活性,突变体比野生型有机磷水解酶结构更加稳定,水解能力得到了提升,是一个比较理想的突变方向。

摘要： 遗传异常是多发性骨髓瘤(MM)患者最主要的预后影响因素。近年来,随着分子遗传学方法的引入,使得对MM中基因组改变的广泛破译成为可能。尽管新发现的改变都没有显著改善MM患者的预后分层,但其中的一些发现特征是点突变,是个体化医疗的潜在治疗靶点。本综述总结了MM中发现的主要遗传异常及其对预后的影响,以期为MM靶向疗法带来新的思路。

摘要： 为揭示人乳头瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)阳性及阴性头颈癌中PIK3CA突变的致癌分子机制,研发针对PIK3CA突变癌症的靶向药物。通过CRISPR/Cas9系统介导的同源重组机制获得HPV16阳性和阴性人永生化角质形成细胞PIK3CA H1047R功能性点突变细胞系,对该点突变细胞系的研究表明,PIK3CA H1047R突变细胞系已构建完成。Western Blot结果表明,基因编辑后的细胞系能够正常表达PIK3CA编码蛋白;RT-PCR测序结果显示,点突变基因能够正常表达;同时,相比于永生化不成瘤细胞,突变后的细胞具有成瘤性并且增殖速度明显加快。功能性点突变细胞系的获得,为进一步揭示PIK3CA突变的致癌分子机制,研发针对PIK3CA突变肿瘤的靶向药物提供理论基础。

摘要： 目的利用Pnpla3^(148M/M)纯合小鼠与Tm6sf2^(167K/K)纯合小鼠杂交方法构建Pnpla3^(148M/M)Tm6sf2^(167K/K)双突变小鼠模型。方法利用Pnpla3Ⅰ148M和Tm6sf2 E 167K单突变纯合小鼠交配出Pnpla3^(148M/M)Tm6sf2^(167K/K)双突变杂合小鼠,再通过自交得到Pnpla3^(148M/M)Tm6sf2^(167K/K)双突变纯合小鼠。选取同窝的Pnpla3^(148M/M)Tm6sf2^(167K/K)(n=6)、Pnpla3^(148M/M)Tm6sf2^(167E)/E(n=6)、Pnpla3^(148I/I) Tm6sf2^(167K/K)(n=6)和野生(Wt)(n=6)雄性小鼠普通饮食喂养8周,在第8周检测小鼠葡萄糖及脂质代谢等指标。多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果琼脂糖凝胶电泳和核酸测序结果表明Pnpla3^(148M/M)Tm6sf2^(167K/K)双突变小鼠模型构建成功。Pnpla3^(148M/M)Tm6sf2^(167K/K)小鼠体质量与其他3种基因型小鼠比较,差异无统计学意义(P值均>0.05),Pnpla3^(148M/M)Tm6sf2^(167K/K)小鼠肝湿重高于Wt小鼠(P0.05)。Pnpla3^(148M/M)Tm6sf2^(167K/K)双突变小鼠的血浆生化指标与其他三种基因型小鼠比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。肝脏油红O切片染色结果显示Pnpla3^(148M/M)Tm6sf2^(167K/K)双突变小鼠的肝脏较Pnpla3^(148M/M)单突变小鼠和Wt小鼠更容易发生脂质积累。结论Pnpla3^(148M/M)Tm6sf2^(167K/K)双突变小鼠模型构建成功,Pnpla3Ⅰ148M和Tm6sf2 E 167K双突变可引起小鼠葡萄糖代谢异常。

摘要： 目的 探讨K-ras蛋白表达及KRAS基因突变在子宫内膜癌(EC)发生及发展中的意义,并分析其与临床病理参数之间的关系。方法 回顾性分析2013年1月至2019年1月在首都医科大学大兴教学医院行全子宫切除术的88例EC患者的临床病理资料。采用免疫组织化学染色及扩增阻滞突变系统聚合酶链反应(ARMS-PCR)的方法,对K-ras蛋白表达及KRAS基因突变情况进行检测。88例行K-ras免疫组织化学染色,36例用ADX-ARMS方法对样本中KRAS基因进行突变检测。结果 88例EC组织中,73例免疫组织化学染色为阳性,15例染色为阴性,阳性率为83. 0%(73/88),K-ras在Ⅰ型和Ⅱ型EC中阳性表达率分别为86. 1%(68/79)、55. 6%(5/9),在高、中、低分化EC中阳性表达率分别为89. 8%(44/49)、85. 7%(18/21)、61. 1%(11/18),差异有统计学意义(P<0.05)。在36例EC中,共检测到KRAS突变15例,其突变率为41. 7%(15/36),主要是KRAS基因2号外显子G12A、G12C、G12D、G12V、G13D位点的突变,分别有2、1、3、5、4例。ARMS-PCR法检测KRAS基因突变与免疫组织化学染色结果的阳性一致性为27. 8%(10/36),阴性一致性为5. 6%(2/36),总一致性为33. 3%(12/36)。结论 K-ras阳性表达与EC的组织学分型及分化程度相关;在EC中检测出KRAS基因点突变,推测KRAS参与了EC的信号传导过程,KRAS基因突变的分子检测结果与免疫组织化学染色结果存在一定的差异。提示目前临床工作中尚不能用K-ras免疫组织化学染色结果简单替代KRAS基因常见位点的点突变。

摘要： 目的使用国家参考品,对人肌营养不良蛋白基因检测试剂盒(荧光PCR-毛细管电泳法)进行评价。方法将国家参考品基因组DNA分别加入到DMD引物混合液1和DMD引物混合液2等两个PCR反应体系中,进行PCR扩增。取扩增产物1、扩增产物2和1% GeneScan 500 LIZ Size Standard,经过95°C变性,在3500Dx基因分析仪进行检测。结果对国家参考品中性染色体正常的DMD基因缺失或者重复的样本,试剂盒均能准确检出标示的相应外显子的缺失或者重复。对X0单体的国家参考品,试剂盒的结果与标示结果不一致。对国家参考品中DMD基因点突变、微缺失的样本以及未检出致病突变的样本,试剂盒均未检出试剂盒范围内的外显子的缺失或者重复。结论国家参考品可以用于评价荧光PCR-毛细管电泳法的人肌营养不良蛋白基因检测试剂盒的准确性和特异性,增加了国家参考品的检测方法适用性。

摘要： 目的:通过全外显子测序(WES)探讨病态窦房结综合征(SSS)家系的致病基因,并探讨其基因突变型与临床表型的相关性。方法:收集在上海市儿童医院就诊的1例SSS患儿及其家系成员的临床资料,采集患儿及家系成员的外周血,抽提血液DNA,通过WES寻找致病基因,利用Sanger测序在家系中验证可能的致病基因突变,使用致病性预测软件预测基因型与表型关系。结果:通过测序结果比对分析,多个生物数据库筛选、过滤,发现SCN5A基因c.999-1G>A位点发生杂合突变,是SSS的可能致病基因,此位点突变在汉族儿童中尚属首次报道。结论:SCN5A基因的c.999-1G>A位点突变是导致散发SSS的致病位点;通过对SSS相关致病基因的研究,对于临床医师精准判断此类疾病以及未来尽早进行心脏生物起搏治疗具有重要的临床意义。

摘要： 目的：对疑似SMN1基因单拷贝的SMA病例进行运动神经元存活基因1(SMN1)的点突变检测,明确患儿的遗传学诊断.在mRNA水平分析这些SMN1点突变对全长SMN1基因(fl-SMN1)转录水平的影响.方法：来自5个无关家系的5例疑似SMN1基因单拷贝的SMA病例为研究对象.结果：①MLPA结果显示,5名患儿的SMN1基因拷贝数均为1.②在5名患儿中确定了5种突变(p.Val19GlyfsX21、p.Ala2Gly、p.Ser8LysfsX23、p.Leu228X和p.Gln15X),其中p.Val19GlyfsX21为新突变,p.Ala2Gly和p.Gln15X为国内首次报告,p.Ser8LysfsX23和p.Leu228X则为中国SMA较常见突变.结论：①本研究共确定了5种SMN1基因突变,移码突变和无义突变(p.Val19GlyfsX21、p.Ser8LysfsX23、p.Leu228X和p.Gln15X)明显影响fl-SMN1转录.而错义突变p.Ala2Gly对fl-SMN1mRNA转录水平影响不显著.②在SMN1基因单拷贝缺失的患儿中有必要进行SMN1基因突变检测,这是此类患儿获得诊断的必要手段.

摘要： 建立准确检测肺癌组织中p53基因点突变的方法。比较毛细管电泳(CE)与聚丙烯酰胺电泳(PAGE)两种方法对肺癌及癌旁正常组织p53基因第249位密码子点突变检测结果。运用CE与PAGE两种方法进行检测。毛细管电泳分离条件为2.0%甲基纤维素[MC)(pH=8.0)筛分介质，分离温度25°C，电场强度200V／cm；PAGE以15%聚丙烯酰胺作为分离胶，用毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种方法均能检测到p53基因第249住密码子点突变，而且毛细管电泳方法检测时间短，且检测率高。毛细管电泳可为大规模进行肺癌的早期诊断提供简便可靠的方法。

摘要： 异烟肼(INH)作为一种高效特异的抗结核药物,在现代抗结核治疗中占有重要的地位.本研究根据国内外文献选择临床INH耐药株中检测到的4个点突变,采用三步法PCR将其引入KatG基因,表达和纯化了相应的诱变蛋白,测定纯化产物的过氧化氢-过氧化物酶活性及荧光光谱的变化,并利用酵母细胞色素C氧化酶模型,联系酶活测定结果进一步探讨了这些点突变引起KatG蛋白结构和功能改变的可能机制.

摘要： 目的及方法: 应用寡核苷酸芯片检测30例肺癌患者手术标本中p53、K-ras、N-ras三种基因的点突变. 结果: (1)杂交温度和时间、探针的长度以及PCR产物的浓度是影响结果的几个关键因素. (2)30例中，p53突变11例，K-ras突变5例，N-ras突变未检出.Ⅲa期以下的病例中，p53突变率为33.3％，K-ras为9.5％；Ⅲb期以上的病例中，p53突变率为44.4％，K-ras为33.3％.K-ras的5例突变全部发生在腺癌(包括腺鳞癌)中，占此型的21.7％. (3)p53芯片检测点突变的结果与测序比较，符合率为76.9％. 结论: 本实验初步建立了较稳定的p53、K-ras、N-ras寡核苷酸芯片检测点突变的方法体系，其在肺癌的临床诊断上有良好的应用前景.

摘要： 喜树碱及其衍生物具有良好的杀虫活性,其作用机理主要是通过作用于昆虫拓扑异构酶Ⅰ-DNA复合物,从而影响细胞的正常分裂,导致害虫死亡.医学研究结果表明,拓扑异构酶Ⅰ对喜树碱及其衍生物敏感,作为喜树碱抑制昆虫生长的主要作用靶标位点,拓扑异构酶Ⅰ催化位点的突变,同样也会导致机体对喜树碱及其衍生物的敏感性下降.

摘要： 目的：分析中国人Leber遗传性视神经病变3个常见的原发致病基因突变的特征。rn 方法：对122例LHON患者分别用异源双链一单链构像多态性(HA-SSCP)、限制性片段长度多态性(RFLP)、突变特异性引物聚合酶链反应(MSP-PCR)及DNA测序等方法检测其mtDNA11778、14484、3460位点的基因突变情况。rn 结果：122例患者中男93例，女29例，11778位点突变1 05例，占86.06％，14484位点突变14例，占11.48％，3460位点突变3例，占2.46％。rn 结论：中国大陆华北中部地区的Leber遗传性视神经病变患者以11778位点基因突变为主，其次为14484位点，3460位点突变较为少见。这一结果与其他研究的结果相似。

摘要： 目的：对重组乙肝VR1012/EHNⅡ/前C-C基因疫苗(VEC)中的蛋白酶切位点进行点突变,并通过动物试验研究突变型前C-C基因疫苗的免疫效果。方法 采用单引物二次PCR法对质粒VEC依次进行基因点突变,得到151+154(VE2)、151+154+164+167点突变(VE4)2种突变型疫苗,转染HepG2细胞并免疫Balb/c小鼠。通过细胞免疫化学、酶联免疫分析、免疫印迹、酶免疫斑点、细胞杀伤试验等方法检测其在HepG2细胞内的表达和诱导小鼠特异性体液、细胞免疫的情况。同时联合小鼠γ干扰素基因疫苗(Vγ)免疫小鼠,研究免疫效果。结果 VEC、VE2、VE4转染HepG2细胞9后均胞浆表达目的蛋白,产物分子量分别为P18、P20、P22左右,细胞裂解液HBeAg含量VE4、VE2N高于VEC,上清中则反之; 疫BALB/C小鼠,证实3种质粒均能引发特异性细胞免疫反应,VE4、VE2强于VEC;联合Vγ后特异性细胞免疫增强。结论 突变型前C-C基因疫苗可在真核细胞表达目的蛋白且免疫效果优于突变前。γ干扰素基因可作为基因佐剂增强HBVDNA疫苗诱导的特异性细胞免疫反应。

摘要： 纤维素的微生物降解是纤维素利用重要途径,纤维素的高效利用需要高纤维素酶活性微生物,本文主要介绍降解纤维素微生物的诱变选育、原生质体融合、基因工程选育方法、基因定点突变等方面的进展.

摘要： 本发明提供了一种高酶活腈水解酶突变株及其制备方法，属于基因工程领域。本发明以恶臭假单胞菌（

摘要： 本申请涉及一套用于水稻基因组碱基定点替换的人工系统及定点突变方法。该人工系统包括：第I调节元件，其包括能够编码如氨基酸序列I的核苷酸序列；其中所述氨基酸序列I选自SEQ ID Nos.1‑6中的一种；第II调节元件，其包括依次从5’端到3’端的第II‑1核苷酸序列和第II‑2核苷酸序列；所述第II‑1核苷酸序列包括靶核苷酸序列，所述第II‑2核苷酸序列包括来源于化脓链球菌的sgRNA核酸序列，第II‑1核苷酸序列与第II‑2核苷酸序列转录融合，其产物能引导第I调控元件编码的蛋白至目标生物基因组中待突变的靶位点处，并将靶位点处的C诱导突变为T、A和G中的一种；或G突变为A、T和C中的一种。

摘要： 本发明公开了一种定点突变改造的褐藻胶裂解酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明的褐藻胶裂解酶突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的褐藻胶裂解酶的第212位谷氨酸替换为组氨酸和/或第222位精氨酸替换为赖氨酸。本发明通过分子对接模拟确定褐藻胶裂解酶活性中心氨基酸并进行定点饱和突变改变蛋白质分子活性位点附近氨基酸残基，提高褐藻胶裂解酶催化效率，进一步提高褐藻胶裂解酶产量。本发明构建的褐藻胶裂解酶分泌能力增强的重组大肠杆菌可将褐藻胶裂解酶酶活较出发菌株提高2.83倍。改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，摇瓶发酵生产褐藻胶裂解酶酶活达到15000U/mL，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。

摘要： 本发明公开了人基因CHD1位点突变和检测CDH1基因的多个位点突变的试剂盒，与CDH1阴性参考序列NG_008021.1相比，所述人基因CHD1发生c.2164+66AC位点突变。包括CDH1基因的c.2076TC、c.1937‑13TC、c.2164+66AC和c.2164+17dupA位点突变；采用Sanger测序技术，可用于快速检测遗传性胃癌患者体内CDH1基因的c.2076TC、c.1937‑13TC、c.2164+66AC和c.2164+17dupA位点突变情况。利用本发明完成的检测结果准确，对遗传性胃癌的临床鉴别诊断有重要的参考意义。

摘要： 本发明涉及一种产生基因点突变的融合蛋白及基因点突变的诱导方法。本发明找到了多种新的胞核嘧啶核苷脱氨酶，通过与nCas9/dCas9为代表的突变型核酸酶组合，得到的新融合蛋白能对位于前间隔序列1‑16位的胞嘧啶(前间区序列邻近基序(PAM)的NGG序列定为21‑23位)实现有效的C‑T碱基突变，且不同的胞核嘧啶核苷脱氨酶为基础的融合蛋白，其可突变范围各有差异。本发明可实现更广范围、更精细的C‑T单碱基替换，拓宽单碱基编辑工具的应用。

摘要： 本发明提供用于鼠伤寒沙门氏菌基因靶向点突变的重组质粒，所述重组质粒含有Kan抗性基因与sacB基因片段。本发明还提供应用该重组质粒进行鼠伤寒沙门氏菌基因靶向点突变的方法。本发明结合red同源重组系统和自杀性质粒构建系统这两种方法的优点，成功构建了同时具备以上两种功能的重组质粒，同时本发明还结合了目前成熟的商品化的对质粒中基因进行点突变的试剂盒，成功的对鼠伤寒沙门氏菌进行了基因的靶向点突变。

摘要： 本申请涉及一套用于水稻基因组碱基定点替换的人工系统及定点突变方法。该人工系统包括：第I调节元件，其包括能够编码如氨基酸序列I的核苷酸序列；其中所述氨基酸序列I选自SEQ ID Nos.1‑6中的一种；第II调节元件，其包括依次从5’端到3’端的第II‑1核苷酸序列和第II‑2核苷酸序列；所述第II‑1核苷酸序列包括靶核苷酸序列，所述第II‑2核苷酸序列包括来源于化脓链球菌的sgRNA核酸序列，第II‑1核苷酸序列与第II‑2核苷酸序列转录融合，其产物能引导第I调控元件编码的蛋白至目标生物基因组中待突变的靶位点处，并将靶位点处的C诱导突变为T、A和G中的一种；或G突变为A、T和C中的一种。

摘要： 本发明适用于基因工程技术领域，提供了高等植物ACS双酶活关键位点突变制备单酶活突变体，ACS单酶活性关键位点包括保守域BOX2保守序列F‑Q‑D‑Y‑H‑G‑[LM]‑[PSKL]中的Q位点和保守域BOX4保守序列T‑N‑P‑S‑N‑P‑L‑G‑[TA]‑[TAMVIF]中的[TA]‑[TAMVIF]位点，以及C‑S裂解酶单酶活性关键位点，包括保守域ACS‑motif 5保守序列D‑F‑x(3)‑K‑N‑I‑H‑L‑[IV]‑S‑D‑E‑I‑[YF]‑[SA]‑G‑[TS]‑V‑F中的第13个氨基酸D。在拟南芥ACS7蛋白中，根据其在所有编码氨基酸中的位置，上述位点分别对应Q98、A221和T222，以及D245位点。将上述位点突变为其他氨基酸，会导致突变后的ACS蛋白只具有ACS或C‑S裂解酶单酶活性。本发明为利用基因工程方法控制乙烯参与的多项生命过程如果实成熟等提供了关键靶点，在抗逆作物分子育种中也具有广阔的应用前景和重要的经济价值。

摘要： 本发明公开了一种定点突变植物纤维素合酶CESA的方法及cesa突变体在制备纳米晶中的应用，属于植物基因工程和纳米材料领域。该方法包括以下步骤：(1)根据纤维素合成酶CESA基因的CRISPR/Cas9编辑靶位点，设计引物并扩增构建靶序列；(2)将靶序列构建到载体上，得到重组载体；(3)将重组载体转化植株，获取次生细胞壁三个CESA基因的点突变体和移码突变体。含有点突变体或移码突变体的转基因植物纤维素结构和性质发生改变，将转基因植物秸秆经酸水解法水解可以制备更小尺寸的纤维素纳米晶。本发明利用基因编辑技术改良水稻纤维素纳米结构，为高效制备小尺寸纤维素纳米晶颗粒提供了低廉且优质的纤维素原材料。

摘要： 本发明公开了一种定点突变改造的褐藻胶裂解酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明的褐藻胶裂解酶突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的褐藻胶裂解酶的第212位谷氨酸替换为组氨酸和/或第222位精氨酸替换为赖氨酸。本发明通过分子对接模拟确定褐藻胶裂解酶活性中心氨基酸并进行定点饱和突变改变蛋白质分子活性位点附近氨基酸残基，提高褐藻胶裂解酶催化效率，进一步提高褐藻胶裂解酶产量。本发明构建的褐藻胶裂解酶分泌能力增强的重组大肠杆菌可将褐藻胶裂解酶酶活较出发菌株提高2.83倍。改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，摇瓶发酵生产褐藻胶裂解酶酶活达到15000U/mL，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。