苦荞过敏原TBa的表位突变及免疫活性鉴定

摘要

前期研究曾分离获得一种纯度均一的天然苦荞过敏蛋白(tartary buckwheat allergen a,TBa),免疫检测发现其为苦荞中的主要过敏原.本实验采用定点突变的方法对得分较高的表位E1的基因进行分子改造,构建5个突变体L39R、L42R、L47R、V52R、L54R.在大肠杆菌BL21中分别进行表达,经Ni2+-NTA亲和纯化后得到纯度较高的重组突变体蛋白.ELISA和点杂交检测发现,与突变前的E1相比,突变体L42R、L47R、L54R的免疫活性明显降低,这表明Leu42、Leu47、Leu54在TBa的过敏性中起着至关重要的作用.