新霉素的直接竞争酶联免疫分析法

摘要

首先用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),合成包被原OVA-NEO,SDS-PAGE进行鉴定;用高碘酸钠法连接辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),制备酶标抗原NEO-HRP并建立直接ELISA检测方法.通过一系列参数的优化,包括包被溶液、封闭溶液、竞争时间、抗体稀释液、pH值、反应温度、显色时间等,最终得到其IC20(抑制率为20%时的标准溶液质量浓度)<1ng/mL、半数抑制量(IC50)为7.6ng/mL,线性方程为y=-0.2798x+0.7456,R2=0.991.直接ELISA总耗时只需大约1h.