海参体壁胶原纤维简化制备方法及其特性分析

摘要

传统的海参体壁胶原纤维提取方法耗时长,采用简化的胶原纤维提取方法,从水洗次数、NaOH溶液洗涤的时间或次数等方面对海参体壁胶原纤维的提取条件进行优化.结果显示,在海参匀浆与洗涤液比例为1∶10(m∶V)及操作温度为4℃的条件下,去离子水洗涤搅拌3次,每次30 min,0.1 mol/L pH 8.0 Tris—HCl缓冲液(含5 mmol/L EDTA,0.5 mol/L NaCl)洗涤8h,0.1 mol/L NaOH溶液洗涤24 h,采用红外分析证实该条件下获得的物质为海参胶原纤维,其提取时间由传统的7d缩短为2d.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)检测得到清晰条带(116～200 kDa),利用液相色谱—质谱(LC—MS/MS)分析法进行测序得到胶原纤维部分序列(Gly-Leu-Pro-Gly-Ala-Arg-Gly-Ser-Asn-Gly-Asn-Asp-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Arg-Gly-Phe-Asp-Gly-Pro-Glu-Gly-Pro-Arg),与球海胆(Paracentrotus lividus)Ⅰ型胶原蛋白前体吻合.采用高效液相色谱法对试验获得的胶原纤维进行氨基酸组成分析,其中甘氨酸含量为32.34％,约占总氨基酸的1/3,脯氨酸和羟脯氨酸含量分别为7.75％,5.10％.