用液相色谱-串联质谱法测定人血浆中血小板活化因子

摘要

目的：建立一种人血浆中血小板活化因子（PAF）的液相色谱－串联质谱测定方法（LC-MS／MS），从而反映临床冠心病独立风险预测因子脂蛋白相关磷脂酶A2（LP－PLA2）活性。方法：血浆添加底物PAF后，37℃孵育10min，加入甲醇沉淀蛋白质，离心取上清进样。血浆PAF经HPLC法分离，串联质谱法定量检测。以PAF的单位时间减少量来衡量LP—PLAa的活性。结果：在1～50μg／mL添加浓度范围内线性关系良好，线性方程y=0．284c＋0．214，r=0．9991（n=6）。低、中、高浓度（3、20、40μg／mL）质控品的批内、批间精密度分别为2．08％～4．75％（n=6）和5．47％～5．86％（n=18），准确度为93．50％～97．66％，PAF和内标非布索坦的回收率为97．36％～100．8％（n=6）。稳定性研究结果表明，PAF在样品预处理后12h和冻融3次后的准确度为99．96此～107．1％（，产6），说明稳定性良好。应用本方法测定10例冠心病患者和健康对照组的PAF反应量，测定结果分别为（22．77±1．26）mg／mL和（19．62±3．94）mg／mL，说明冠心病患者LP—PLA2活性明显高于健康对照组（P＜0．05）。结论：本方法专一灵敏、准确可靠、重复性好、检测通量高，可作为心血管疾病诊断指标之一，用于临床冠心病与缺血性卒中风险预测的研究。