PTEN基因真核表达载体的构建及在COS-7细胞株中的表达

摘要

目的 构建人PTEN基因的真核表达载体并在COS-7细胞中高效表达.方法 从人喉粘膜组织中分离总RNA,经逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)得到PTEN全基因.克隆入PTEM-T easy载体上,经过PCR、酶切鉴定为阳性的克隆,进行测序分析.然后将所获得的基因定向克隆入PCI-neo载体中构建表达载体.并将其转入COS-7细胞中进行瞬时表达.结果 反转录PCR扩增后的产物,在约1.4 kb处可以看见特异性条带,序列分析表明与GenBank中的PTEN基因序列相同.PCI-PTEN真核载体转染COS-7细胞后的Western blotting证明表达产物与抗人PTEN单克隆抗体有特异性免疫反应.结论 成功构建出PTEN真核表达载体,诱导产生蛋白经检测证实为PTEN蛋白,为进一步研究PTEN在喉癌细胞株中的抑癌效果及抑癌机理奠定基础.