E2F-1基因真核表达载体的构建及其对胃癌细胞株MKN-45增殖的影响

摘要

背景与目的:E2F-1基因在多种肿瘤细胞中过表达,并表现出抑制或促进肿瘤细胞增殖的不同特性.本研究通过构建E2F-1基因真核表达载体.分析E2F-1过表达对胃腺癌细胞株MKN-45的影响.方法:巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增E2F-1基因片段,用pCMV-HA载体构建真核重组质粒,转染MKN-45细胞(转染COS-7细胞用以鉴定所构建的载体).Western blot检测转染情况.并通过克隆形成实验、MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期,观察E2F-1过表达对MKN-45细胞的影响.结果:pCMV-E2F1-HA重组质粒成功转染MKN-45细胞.转染pCMV-E2F1-HA的MKN-45细胞形成的克隆数为4.7±1.8,明显少于转染空载体组的30.2+6.7(P＜0.01).转染pCMV-E2F1-HA的MKN-45细胞增殖随时间而减慢,第5、6、7天的细胞增殖率分别为73.5%、63.5%和56.1%,明显低于转染空载体组(P＜0.01).与转染空载体组相比,表达E2F-1基因的MKN-45细胞在G0/G1期所占比例明显提高(71.4% vs.59.7%,P＜0.05),S期所占比例明显下降(18.7% vs.30.7%,P＜0.05).结论:成功构建E2F-1基因真核表达载体,E2F-1过表达可抑制MKN-45细胞的增殖.