人微管蛋白辅助因子A基因真核表达载体的构建鉴定及对肾癌细胞株786-0增殖的影响

摘要

目的构建含有人微管蛋白辅助因子A（TBCA）的真核表达载体并观察其对肾癌细胞株786-0增殖的影响。方法构建真核表达载体pcDNA3.0-Flag-TBCA和pCMV-TBCA-IRES-EGFP,并进行酶切、测序检验、脂质体转染细胞后利用Western blot法检测蛋白表达。以四唑氮化合物（MTS）法绘制细胞生长曲线。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.0-Flag-TBCA和pCMV-TBCAIRES-EGFP。转染后TBCA在细胞中表达明显升高（P＜0.05）。但在转染后第3、4、5、6天,重组质粒组吸光度值分别为0.52±0.04、0.85±0.04、1.20±0.08、1.61±0.11;与对照组比较无统计学意义（P＞0.05）。结论 TBCA的过表达载体构建成功,但在786-0细胞中过表达TBCA后对并不能对细胞增殖产生明显影响。