IPaH-1基因在志贺氏菌表达的检测及PCR 条件的优化

摘要

目的检测IPaH1基因在志贺氏菌特异性表达水平并对 PCR 条件进行优化.方法应用设计的针对IPaH1基因的特异性引物,通过 PCR 法检测IPaH1基因在鲍氏志贺氏菌、野生志贺氏菌、大肠埃希氏菌、出血性大肠埃希氏菌(O157：H7)、肠炎沙门氏菌、阪崎肠杆菌、普通变形杆菌、蜡样芽孢杆菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、单增生李斯特菌、副溶血性弧菌、产气荚膜梭菌的表达水平,并对 PCR 反应中退火温度、最佳引物浓度等进行优化.结果①在志贺氏菌检测到IPaH1基因特异性表达,而大肠埃希氏菌、出血性大肠埃希氏菌(O157：H7)、肠炎沙门氏菌、阪崎肠杆菌、普通变形杆菌、蜡样芽孢杆菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、单增生李斯特菌、副溶血性弧菌、产气荚膜梭菌未见表达；②PCR 法扩增志贺氏菌IPaH1基因时,第一对引物IPaH1-1的最适退火温度为55.0℃-59.0℃,第二对引物IPaH1-2为51.0℃-55.0℃；两对引物理想终浓度均为0.1μM.结论 IPaH1基因特异表达于志贺氏菌；应用设计的引物通过 PCR 法扩增志贺氏菌IPaH1基因的最适退火温度分别为55.0℃-59.0℃、51.0℃-55.0℃,最适引物终浓度均为0.1μM.