实时荧光定量PCR检测RAD9基因在结直肠癌组织中的表达意义

摘要

目的：结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，位居全球恶性肿瘤发病率第三位，在我国恶性肿瘤中其发病率占第四位。近年来随着人民生活水平不断升高，饮食结构和饮食习惯的改变及人口老龄化，结直肠癌的发病率在逐渐上升。目前，结直肠癌的确切病因尚未完全清楚，随着分子生物学的快速发展，人们普遍认为结直肠癌的发生、发展是一个多因素、多阶段的复杂过程，是遗传因素和环境因素共同作用的结果，涉及多基因改变的累积过程，如癌基因的激活，抑癌基因和错配修复基因(mismatchrepair，MMR基因)的突变及失活，特别是抑癌基因的失活在其中发挥重要作用。
　　RAD9基因首先是在裂殖酵母突变体中被发现，是一个进化上高度保守的基因，RAD9基因属于DNA损伤反应系统(DNA damage response)中的一个重要成员。该系统负责应对各种DNA损伤，起到维护基因组稳定的作用。很多研究表明，RAD9基因参与细胞周期检测点检测、DNA损伤修复和细胞凋亡，在维持基因组稳定性和抑制肿瘤细胞增殖方面起到重要作用，因此，RAD9基因可能是一种抑癌基因。有研究表明，RAD9基因在皮肤癌、胃癌等恶性肿瘤中表达水平下降，这也提示RAD9基因和恶性肿瘤的发生、发展密切相关。为了探讨RAD9基因在结直肠癌中发挥的作用，本文通过利用实时荧光定量PCR(real-time flurecence quantitivepolymerase chain reaction，FQ-PCR)技术检测RAD9 mRNA在结直肠癌组织中及癌旁正常组织中的表达水平，并结合临床病理资料，探讨RAD9基因与结直肠癌之间的关系，为研究结直肠癌发生、发展的原因及临床诊治提供一定的理论依据。
　　方法：
　　选取42例结直肠癌病人的癌组织及相应的癌旁正常组织(距癌缘>10cm)，采用实时荧光定量PCR技术检测结直肠癌组织中及癌旁正常组织中RAD9 mRNA的表达水平，以GAPDH作为内参标准，对比观察结直肠癌组织和正常组织之间的表达差异，并结合卫生部结直肠癌诊疗规范(2010版)，将实验数据按照临床病理特点进行分层分析，实验结果采用统计软件SPSS13进行统计学分析，以P<0.05认为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1 RAD9 mRNA在结直肠癌组织和正常组织中均有不同程度的表达，其中85.71％(36/42)结直肠癌组织中RAD9 mRNA表达水平比相对应的正常组织表达水平降低。经过数据处理后结直肠癌组织中RAD9 mRNA的相对表达量(0.65±1.12)低于正常组织(4.93±7.99)，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　2结直肠癌组织中RAD9 mRNA表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、部位无关，差异无统计学意义(P>0.05)。
　　3有淋巴结转移的结直肠癌组织RAD9 mRNA的相对表达量(0.30±0.51)比无淋巴结转移的结直肠癌组织(0.97±1.40)降低，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　4 TNM(Ⅲ期+Ⅳ期)的结直肠癌组织RAD9 mRNA相对表达量(0.30±0.49)比TNM(Ⅰ期+Ⅱ期)的结直肠癌组织(1.01±1.43)降低，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　5结直肠癌组织中RAD9 mRNA表达水平随着肿瘤分化程度的降低而呈下降趋势，经统计学分析，不同分化程度的组别之间差异有统计学意义(P<0.05)，组间比较显示：高分化结直肠癌组中RAD9 mRNA的相对表达量(1.21±0.65)高于中分化组(0.73±0.97)，差异有统计学意义(P<0.05)，高分化结直肠癌组中RAD9 mRNA的相对表达量(1.21±0.65)高于低分化组(0.19±0.11)，差异有统计学意义(P<0.05)，中分化结直肠癌组中的RAD9 mRNA相对表达量(0.73±0.97)和低分化组(0.19±0.11)之间差异无统计学意义(P>0.05)。
　　结论：
　　1结直肠癌组织中RAD9基因的表达水平比癌旁正常组织降低，提示RAD9基因表达水平可能和结直肠癌的发生、发展相关，RAD9基因表达水平的降低可能会导致细胞基因组不稳定性升高，同时抑制了肿瘤细胞的凋亡，从而促进了结直肠癌的发生、发展。
　　2结直肠癌组织中RAD9 mRNA表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位无关。
　　3结直肠癌组织中RAD9 mRNA的表达水平随淋巴结出现转移、肿瘤组织分化程度降低及肿瘤期别增加呈下降趋势，提示RAD9的表达水平可能与结直肠癌细胞的侵袭性、转移性及患者的预后相关。