亚砷酸钠对L-02细胞脂代谢基因SREBP-1c、PPARα和FAS表达的影响

摘要

目的观察亚砷酸钠(NaAsO2)对人正常肝细胞(L-02细胞)脂代谢基因固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和脂肪酸合成酶(FAS)表达的影响。方法体外培养L-02细胞,分别以0(对照)、2、4、8、16、32、64、128μmol/L NaAsO2染砷24 h,采用CCK-8法检测细胞存活率,并制作拟合曲线计算半抑制浓度(IC50),以IC50的0、1/8、1/4、1/2作为染砷剂量进行后续实验。采用甘油磷酸氧化酶-过氧化氢酶(GPO-PAP)法检测细胞甘油三酯(TG)含量;实时荧光定量PCR检测SREBP-1c、PPARα、FAS mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测SREBP-1c和PPARα蛋白表达水平。结果8、16、32、64、128μmol/L NaAsO2组细胞存活率[(92.000±1.414)%、(91.000±0.000)%、(76.500±0.707)%、(53.000±1.412)%、(47.000±1.412)%]明显低于对照组[(100.000±0.000)%,P均<0.01],IC50为64μmol/L,以0(对照)、8、16、32μmol/L NaAsO2进行后续实验。与对照组[(1.000±0.000)mmol/g prot]比较,8、16、32μmol/L NaAsO2组TG含量[(0.691±0.064)、(0.474±0.162)、(0.184±0.045)mmol/g prot]显著降低(P均<0.01)。与对照组比较,各染砷组SREBP-1c、PPARα、FAS mRNA表达水平,SREBP-1c、PPARα蛋白表达水平显著降低(P<0.01或<0.05)。相关性分析可见,NaAsO2含量与细胞TG含量,SREBP-1c和PPARα蛋白表达水平呈负相关(r=-0.954、-0.875、-0.965,P均<0.01)。结论NaAsO2可引起L-02细胞TG含量减少及脂代谢相关基因SREBP-1c、PPARα和FAS表达降低,提示砷致肝损伤过程中可引起脂代谢障碍发生。