两种乙型肝炎病毒恩替卡韦耐药突变株质粒的构建及其病毒学特征分析

摘要

目的 构建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)恩替卡韦耐药突变株表达质粒并对其体外复制病毒学特征进行研究.方法 以含1.2倍HBV DNA全基因的质粒pUC-HBV1.2-WT为模板,应用PCR定点诱变技术构建恩替卡韦耐药突变株质粒,转染人肝癌细胞系HepG2细胞,建立HBV体外复制细胞模型,分析耐药突变株复制水平及表达活性.结果 成功构建恩替卡韦耐药突变株表达质粒pETv1(rtL180M+ M204V+ I169T+ M250V)和pETV2(rtL180M+ M204V+ T184G+ S202I).HBV体外复制细胞模型培养上清可检测到HBsAg和HBeAg及HBV DNA,细胞内可检测到HBV复制中间体;耐药突变株复制能力分别为野生株的47.4％和38.6％.结论 成功构建乙型肝炎病毒恩替卡韦耐药突变株表达质粒.不同突变形式的ETV耐药突变株体外复制能力较野生株下降.