大鼠海马神经元TLR4介导的MyD88依赖途径在神经炎症中的作用

摘要

目的:研究大鼠海马神经元是否有Toll样受体4(TLR4)介导的的髓样分化因子88(MyD88)依赖途径及该途径的激活在神经炎症中的作用.方法:采用体外培养7d的新生大鼠海马神经元,细胞免疫荧光双标法鉴定海马神经元纯度.用TLR4配体脂多糖(LPS)或TLR4抗体预处理海马神经元,以激活或阻断TLR4的作用.实时定量PCR(RT-qPCR)方法检测海马神经元中MyD88、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6) mRNA的表达；Western blot方法测定海马神经元MyD88和TRAF6蛋白水平；细胞免疫荧光双标法观察海马神经元中核因子κB/P65 (NF-κB/P65)的表达定位及TLR4激活或阻断后NT-κB/P65核易位情况；ELISA检测培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和一氧化氮(NO)的水平.结果:LPS能上调海马神经元MyD88和肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF6) mRNA水平；促使NF-κB/P65转位至核；增加MyD88和TRAF6蛋白的表达；增加海马神经元培养上清中TNF-α、IL-1β和NO含量；TLR4抗体预处理能减弱LPS对海马神经元NF-κB/P65核易位作用及降低培养上清中TMF-α、IL-1β和NO的水平.结论:大鼠海马神经元有TLR4介导的的MyD88依赖途径,该途径的激活能导致TNF-α、IL-1β和NO含量的增加.海马神经元TLR4介导的MyD88依赖途径参与了神经炎症反应,神经元不是神经炎症反应中的被动者.