慢病毒介导抗菌肽PR-39基因在免骨髓间充质干细胞中的表达及抗菌活性检测

摘要

目的 构建脯氨酸精氨酸抗菌肽(proline-arginine rich 39-amino acid peptide,PR-39)慢病毒载体,并转染兔骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSC),检测其在BMSC中的表达及抗菌活性.方法 PCR扩增目的 克隆,并连接入慢病毒载体质粒pGC-FU中,与包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0在脂质体2000介导下共转染293T细胞生产慢病毒颗粒,Real-Time PCR法检测其滴度;分离培养BMSC,BMSC转染PR-39慢病毒,荧光显微镜观察及流式细胞仪检测其转染效率,RT-PCR检测PR-39基因表达,并检测PR-39抗菌活性.结果 成功包装出滴度为2×10~9TU/mL的PR-39慢病毒载体,并转染BMSC,转染72 h后可观察到细胞呈现绿色荧光,转染效率为74.09%,同时RT-PCR检测BMSC表达PR-39基因,其上清液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用,抑菌率为98.43%(P＜0.05).结论 在慢病毒介导下,BMSC成功表达分泌具有较强抗菌活性的抗菌肽PR-39.