抗菌肽PR-39在兔骨髓间充质干细胞中的分泌表达及抗菌活性检测

摘要

目的：通过构建包含脯氨酸精氨酸抗菌肽（proline-arginine rich39-amino acid peptide，PR-39）的慢病毒载体，转染兔骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells，BMSC），并检测其在BMSC中的表达及抗菌活性。
　　 方法：PCR扩增目的基因，连接入慢病毒载体质粒pGC-FU中，与包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0在脂质体2000介导下转染293T细胞包装出慢病毒颗粒，Real-Time PCR检测滴度；分离培养BMSC，并用PR-39慢病毒载体转染BMSC，荧光显微镜观察和流式细胞仪检测转染效率，RT-PCR法检测目的基因的表达情况，同时检测PR-39抗菌活性。
　　 结果：成功得到滴度为2×109 TU/ml的PR-39慢病毒颗粒，并成功转染BMSC，转染72h后观察到细胞呈现绿色荧光，流式细胞仪检测到其转染效率为74.09％，RT-PCR检测到BMSC中有PR-39基因表达，细胞培养上清液对金黄色葡萄球菌有抑制作用，与对照组相比有显著差异，抑菌率为98.43％（P<0.05）。
　　 结论：通过慢病毒介导的PR-39基因能在BMSC中成功表达分泌目的蛋白，同时具有较强抗菌活性。