绵羊GPx5基因克隆、生物信息学分析及表达特性的研究

摘要

本研究旨在克隆绵羊硒非依赖性谷胱甘肽过氧化酶5(GPx5)基因,预测蛋白结构与功能,并研究其在睾丸和附睾头中的表达定位特点.采用5'RACE和RT-PCR克隆GPx5基因,用生物信息学分析预测GPx5结构、特性和功能,采用免疫组化和Western blotting方法进行表达定位研究.结果显示,绵羊GPx5的开放阅读框(ORF)660 bp (GenBank:JQ 320282),GPx5编码219aa,分子量约25 ku的碱性蛋白,第1～21个aa为潜在的信号肽,其三级结构域为αβ型,有11个可能磷酸化位点,有7种保守的特异性蛋白质激酶的结合位点;亚细胞定位预测显示GPx5存在于细胞外;其38～151aa属于谷胱甘肽过氧化酶家族保守结构域,其36～215aa类硫氧还蛋白超家族保守结构域.绵羊GPx5在附睾头的假复层柱状上皮细胞大量表达,附睾头上皮细胞和睾丸间质细胞少量表达,附睾头液和精浆中均有GPx5蛋白.绵羊GPx5是分泌型,具有谷胱甘肽过氧化酶活性和类硫氧还蛋白作用.GPx5可能是某信号转导通路的信号分子,但需进一步验证.