绵羊透明质酸酶-2基因克隆载体的构建及生物信息学分析

摘要

透明质酸酶(hyaluronidase)是能够水解组织细胞基质当中透明质酸的一种蛋白水解酶,可增加组织的通透性,促进皮下和局部组织的渗出液或血液的吸收.本试验为了构建绵羊Hyal-2基因体外克隆载体，并在测定Hyal-2基因序列基础上进行生物信息学分析，进一步了解Hyal-2的生物学功能及与肿瘤发生之间的关系。根据Genebank中登录的Hyal-2的基因序列，设计两对引物，并分别在前段上游和后段下游引物57端引入HindⅢ酶切位点和BamHI酶切位点，以健康绵羊胎盘组织提取RNA后反转录产物cDNA为扩增Hyal-2基因的模板，进行分段PCR扩增。以扩增的两段产物为共同模板运用Overlapping PCR技术扩增全长Hyal-2基因。将经双酶切并纯化之后的目的片段连接于克隆载体PMD19-T上，转化感受态细胞DH5a，之后以菌液PCR方法鉴定为阳性的菌液扩大培养后，以质粒小提试剂盒提取质粒，进行单、双酶切鉴定和序列测定，确定成功构建了Hyal-2基因克隆载体，并将测定的基因序列进行生物信息学分析。本试验结果可为Hyal-2的分子生物学与分子病理学相关研究提供实验材料，对迸一步分析研究Hyal-2基因的功能提供基础性工作。