北京棒杆菌AS1.299高丝氨酸脱氢酶突变体L200F/D215K的异源表达及酶学性质

摘要

[目的]对北京棒杆菌Corynebacterium pekinense高丝氨酸脱氢酶(homoserine dehydrogenase,HSD)进行空间结构改造从而获得优良性能新酶.[方法]利用定点突变技术构建HSD双突变体L200F/D215A、L200F/D215E、L200F/D215G和L200 F/D215K,并将其转入大肠杆菌E.coli BL21中进行高效表达,选取催化效率最高的双突变体L200F/D215K与双突变前的L200F进行动力学和酶学性质比较.[结果]HSD双突变体L200 F/D215K的Vmax为36.92 U/mg,较L200F提高1.24倍;最适反应温度为37℃,较L200F提高2℃;最适反应pH为7.5,与L200F经验值相同;最适温度下的半衰期为4.16 h,较L200F提高1.12倍;L200 F/D215K和L200F对有机溶剂和金属离子均表现出较好的抗性.[结论]HSD通过空间结构改造活力得到提高,并且其酶学性质得到优化.本研究有助于认识HSD突变体的酶学性质,为其新酶的研发利用提供有力依据.