散发性、迟发性帕金森病Parkin基因分子遗传学研究

摘要

背景：帕金森病是第二大常见的神经退行性疾病，在大部分病例中帕金森病的病因复杂，分子遗传学在寻找其病因方面有了重大的进展。迄今为止，已发现与帕金森病相关基因有10余种，其中有6个基因确定和其致病有关。这6个基因分别为a-synuclein(SNCA)，Parkin(PARK2)，PTEN-induced putative kinase1(PINK1)，DJ-1(PARK7)，Leucinerich repeat kinase2(LRRK2)，ATP13A2。Parkin基因是目前研究的热点之一，在遗传性帕金森病及早发性帕金森病中，发现突变较多。有研究报道，Parkin基因在散发性帕金森病中也存在致病突变，但是突变频率及突变形式不确定，报道数据不甚一致。
　　 目的：检测分析散发性、迟发性帕金森病(Late Onset Parkinson’s disease，LOPD)患者中帕金森病相关致病基因Parkin基因第3、4、5、7号外显子突变情况，探讨Parkin基因突变与中国山东地区散发性迟发性帕金森病的相关性。
　　 方法：本实验共包括80名个体，其中40例散发性、迟发性帕金森病患者为病例组，40例正常健康人为对照组，所有散发性、迟发性帕金森病患者，均符合中华医学会神经病学分会运动障碍及帕金森病学组制定的帕金森病的诊断标准，40例正常健康人为同期在我院健康查体者，均排除神经系统疾病。所有入组成员均抽取肘静脉血，并根据标准程序对所有病人和对照者提取基因组DNA，分别应用Parkin基因的第3、4、5、7号外显子的引物对所提取的全部样本的DNA进行聚合酶链反应(PCR)，所有扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，在紫外灯下观察扩增产物是否在正常范围，对于获得的目的产物纯化后进一步行直接测序，最后将测序结果与基因组库相比对，以确定Parkin基因突变的部位及形式。
　　 结果：所有样本经聚合酶链反应后，均出现扩增产物，经琼脂糖凝胶电泳分析并在紫外灯下观察，所有样本均出现目的产物，未发现异常条带，未发现Parkin基因外显子缺失或重复插入；所有扩增产物进行基因测序分析，经与基因库相比对，未发现基因突变。
　　 结论：所有病例组和对照组样本经PCR扩增及琼脂糖电泳分析，发现均在目标范围内出现目的条带；经基因比对分析，发现所有被检测的散发性、迟发性帕金森病患者均未发现缺失、重复、插入及点突变；Parkin基因突变在山东地区的散发性、迟发性帕金森病人中的突变率较低。