散发性帕金森病患者Parkin基因的分子遗传学研究

摘要

目的：检测分析散发性帕金森病( Parkinson's disease，PD)患者的parkin基因第3、4、5、6、7号外显子的突变情况，探讨parkin基因及其突变与中国人散发性PD发病的相关性。 方法：对32例散发性PD患者和40例正常健康人的parkin基因第3、4、5、6、7号外显子进行PCR扩增，采用聚合酶链反应-单链构象多态性技术(PCR-SSCP)进行基因突变检测，对异常SSCP结果的标本进一步进行DNA序列测定，以确定parkin基因突变性质及其突变发生的部位。对发生基因突变和没有基因突变的PD患者的临床特征进行了比较。 结果：①经琼脂糖凝胶电泳检测，所有病例的parkin基因外显子均扩增成功，未发现parkin基因外显子缺失突变。②PCR-SSCP检测显示9例PD患者有parkin基因外显子的点突变（2例患者有parkin基因第3外显子点突变，5例患者有parkin基因第4外显子点突变，2例患者有parkin基因第5外显子点突变）。正常人中未发现parkin基因外显子缺失和点突变。③基因测序显示parkin基因第4外显子点突变为第130位碱基发生置换G→A，parkin基因第5外显子点突变为第65位碱基缺失，parkin基因第3外显子未显示碱基改变。④存在parkin基因点突变的散发性PD患者发病年龄早、病情重。 结论：①所有被检测的散发性PD患者中未发现parkin基因外显子缺失突变；②部分被检测的散发性PD患者中存在少量parkin基因点突变，突变率较低；③存在parkin基因点突变的散发性PD患者发病年龄早、病情重。④parkin基因点突变可能是部分散发性PD发病原因之一。

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引言

第一章材料与方法

1.1研究对象

1.2实验材料

1.2.1主要实验仪器

1.2.2主要试剂

1.3实验方法

1.3.1样本的收集与保存

1.3.2基因组DNA的提取

1.3.3血浆DNA纯度的测定

1.3.4 PCR扩增

1.3.5扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分析

1.3.6 SSCP分析

1.3.7 DNA测序

1.3.8患者临床资料对比分析

1.3.9实验注意事项

第二章结果

2.1 parkin基因第3～7外显子PCR扩增结果

2.2 parkin基因第3～7外显子SSCP检测结果

2.3 parkin基因的序列分析结果

2.3.1parkin基因第3～7外显子正常序列测序结果

2.3.2散发性PD患者parkin基因测序结果

2.4parkin的基因突变和患者临床表型的关系

第三章讨论

3.1 parkin基因及其作用

3.2 parkin基因突变与帕金森病

3.3 parkin基因突变与帕金森病临床表现的关系

3.4 parkin基因突变检测方法的应用

结论

参考文献

综述 帕金森病parkin基因突变的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢