饲用复合酶高产菌株的筛选、产酶及酶学性质研究

摘要

通过透明圈法初筛、摇瓶液态发酵和产酶测定，得到产植酸酶菌株92株。然后通过固态发酵和产酶测定，筛选出一个比较优异的饲用复合酶产生菌株——黑曲霉WP1。 黑曲霉WP1在以麸皮为原料的固态培养基中进行发酵时，能够产生丰富的饲用酶系，包括植酸酶、纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、淀粉酶和酸性蛋白酶。 黑曲霉WP1固态发酵的适宜条件为：300mL三角瓶中装麸皮20g，水16mL，添加0.3gNaNO<,3>和0.2g SDS，培养温度28℃，培养基初始pH值6.0。在优化培养条件下，黑曲霉WP1在发酵第六天各种主要饲用酶的活力分别为：植酸酶943 U/g，纤维素酶3089 U/g，木聚糖酶651U/g，淀粉酶508 U/g。 以WP1为菌种，经过固态发酵、浸提、超滤浓缩、与赋型剂混合和干燥最终所得酶制剂的植酸酶活力为1000U/g、纤维素酶活力为2817 U/g、木聚糖酶活力为881U/g、果胶酶活力为558 U/g、β-葡聚糖酶活力为55U/g、淀粉酶活力为1082 U/g、酸性蛋白酶活力为429 U/g(均非在最适条件下测得)。 黑曲霉WP1所产植酸酶、纤维素酶、木聚糖酶和淀粉酶的最适反应温度分别为55℃，70℃，50℃和70℃.植酸酶在pH值4.5和2.0有两个酶活力高峰；纤维素酶、木聚糖酶、淀粉酶的最适宜pH值分别为4.0，3.5和5.0。植酸酶在55℃保温1h，酶活力保持率仍然为87％；纤维素酶、木聚糖酶和淀粉酶在50

目录

文摘

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声明

1引言

1.1文献综述

1.1.1概述

1.1.2各种饲用酶类介绍

1.1.3饲用复合酶高产菌株的选育研究

1.1.4饲用复合酶制剂的发酵生产

1.1.5复合酶制剂在畜禽生产中的应用

1.2立题依据

1.3主要研究内容

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1主要原料

2.1.2主要试剂

2.1.3培养基

2.1.4主要仪器设备

2.2主要试验方法

2.2.1筛选方法

2.2.2固态发酵酶液制备方法

2.2.3酶活力的测定方法

2.2.4菌株形态观察和初步鉴定方法

2.2.5 WP1固态发酵产酶进程研究

2.2.6 WP1固态发酵产酶条件的优化

2.2.7植酸酶最适反应温度及热稳定性的测定

2.2.8纤维素酶、木聚糖酶和淀粉酶最适反应温度及热稳定性的测定

2.2.9植酸酶最适反应pH的测定及pH稳定性研究

2.2.10纤维素酶、木聚糖酶和淀粉酶最适反应pH的测定及pH稳定性研究

2.2.11复合酶制剂的制备

2.2.12复合酶制剂在蛋鸡养鸡场应用试验

3结果与分析

3.1饲用复合酶高产菌株的分离筛选

3.1.1标准曲线的制作

3.1.2植酸酶高产菌株的初步筛选

3.1.3植酸酶高产菌株的复筛

3.1.4饲用复合酶高产菌株的筛选

3.1.5 WP1形态观察及初步鉴定

3.2黑曲霉WP1固态发酵产酶进程研究

3.3黑曲霉WP1固态发酵产酶条件研究

3.3.1主要原料配比对产酶的影响

3.3.2料水比对产酶的影响

3.3.3附加氮源对产酶的影响

3.3.4 NaNO3添加量对产酶的影响

3.3.5温度对产酶的影响

3.3.6初始pH值对产酶的影响

3.3.7表面活性剂及其含量对产酶的影响

3.4黑曲霉WP1所产主要饲用酶类的应用性质研究

3.4.1各种酶的最适作用温度

3.4.2各种酶的最适作用pH

3.4.3各种酶的热稳定性研究

3.4.4各种酶的pH稳定性研究

3.5饲用复合酶制剂在蛋鸡养鸡场应用试验

3.5.1黑曲霉WP1饲用复合酶制剂对蛋鸡生产性能的影响

3.5.2黑曲霉WP1饲用复合酶制剂对蛋鸡蛋品质量的影响

3.5.3黑曲霉WP1饲用复合酶制剂对蛋鸡的粪便含磷量的影响

4讨论

4.1高产菌株的筛选

4.2产酶条件优化

4.3酶学性质研究

4.4总结及下一步的工作设想

结论

参考文献

在读期间发表的学术论文

作者简介

致谢