食品中几种违禁药物快速检测方法的研究

摘要

随着环境中外源性化学物质的日益增多和人们公共健康意识的提高，食品中的违禁药物的添加与药物滥用问题已经成为一个世界性的挑战和全球性的重要公共卫生问题。尤其是保健品中的PDE-5抑制剂类药物与畜产品中的抗病毒药物的违禁添加和滥用现象尤为严重，而目前针对这两类违禁药物的检测手段主要依赖于色谱质谱联用等大型仪器手段。因此，本文以PDE-5抑制剂类药物，抗病毒的药物利巴韦林为对象，建立针对 PDE-5抑制剂类药物的间接竞争酶联免疫分析方法与胶体金免疫层析试纸条、利巴韦林分子印迹电化学传感器等快速检测方法。主要研究内容和结果如下：
　　（1）通过分子模拟，定向设计了针对多种 PDE-5抑制剂类药物的半抗原Norneovardenafil，制备了兔多克隆抗体，抗体的效价为1:512000，对1μg/mL药物浓度的西地那非抑制率为80%、瓦地那非抑制率为87%、红地那非抑制率为88%、米罗那非抑制率为70%；基于制备的广谱性抗体建立了检测多种PDE-5抑制剂类药物类药物的间接竞争酶联免疫分析（ic-ELISA）与胶体金免疫层析试纸条（GICA）方法。该方法除了他达那非、伐地那非、育亨宾外的其他PDE-5抑制剂类药物均能检测对红地那非的线性范围为0.74-27.68ng/mL，IC50为4.54ng/mL；西地那非的线性范围为0.97-70.72ng/mL，IC50为8.32ng/mL；瓦地那非的线性范围为1.45-22.72ng/mL，IC50为5.70ng/mL；乌地那非的线性范围为0.20-22.8 ng/mL，IC50为2.16 ng/mL；保健酒样品中各类药物的的平均添加回收率在80.9%~108.1%之间，变异系数在3.3%~8.2%之间；制备的胶体金免疫层析试纸条（GICA）对西地那非的检测限为10 ng/mL，红地那非的为20 ng/mL，瓦地那非的检测限为5 ng/mL，艾地那非的检测限为15 ng/mL，乌地那非的检测限为20 ng/mL。建立的两种检测方法与HP LC-MS/MS方法检测结果相关性良好[R2=0.9977（ELISA），GICA正确率达到100%]。
　　（2）利用原位聚合分子印迹技术，以3-氨基苯硼酸为功能单体，利巴韦林为目标分子，以硼酸和顺式二醇在不同酸碱度条件下的可逆形成环内酯键为原理，在玻碳电极表面原位聚合形成利巴韦林分子印迹膜，研制了测定抗病毒药物利巴韦林的分子印迹电化学传感器。采用循环伏安法（CV），差分脉冲法（DPV）对印迹膜性能进行研究。DPV测试表明：在最优实验条件下，利巴韦林的浓度在5.0×10-8～1.0×10-5mol/L范围内成良好的线性关系（R2=0.9952），检测限为1.5×10-8mol/L(S/N=3)。特异性实验表明制备的传感器对利巴韦林的选择性良好。

目录

声明

主要英文缩略表

1 前言

1. 1 保健食品中PDE-5抑制剂类药物违法添加及危害

1. 2 畜产品中抗病毒药物的残留及危害

1. 3几种违禁药物检测方法研究现状

1. 4 本研究的目的意义、内容及技术路线

2. 1 实验材料

2. 2 实验方法

2. 3 间接酶联免疫分析方法的建立

2. 4 胶体金免疫层析试纸条的制备

2 .5利巴韦林分子印迹电化学传感器的制备

3结果与分析

3. 1P DE-5抑制剂类药物多残留免疫分析方法的建立

3 .2 利巴韦林分子印迹传感器的制备

4. 1 讨论

4. 2 结论

4. 3 创新点

4. 4 展望

致谢

参考文献

附录A 作者攻读硕士学位期间发表论文情况

附图