一个新的IL36RN基因罕见单核苷酸变异在儿童泛发性脓疱型银屑病发病中的作用研究

摘要

第一部分离心法增加HaCaT细胞的基因转染效率 目的： HaCaT细胞是自发性的人永生化表皮细胞株，常用于皮肤功能与疾病的相关研究，但常规脂质体法转染该细胞的效率极低。本研究主要探讨离心是否能够增加脂质体法转染HaCaT细胞的效率。 方法： 即以 Lipofectamine?2000为脂质体转染试剂，pEGFP-C1为质粒转染HaCaT细胞后分别使用常规法和离心法处理，利用荧光倒置显微镜、流式细胞仪测定转染效率。细胞增殖活力实验检测离心是否对细胞活力产生影响。荧光素酶报告基因、Western Blot实验检测离心法实际效应对目的基因表达的影响。 结果： 离心法处理组所测得的转染效率均高于常规法处理组，差异有统计学意义。荧光素酶报告基因实验、Western Blot实验则进一步证实了转染后离心的性价效应能增加目的基因的表达，具有较高的实用性。 结论： 常规转染步骤后离心能够增加HaCaT细胞的基因转染效率。 第二部分 IL36RN基因突变鉴定及其致病机制的研究 目的： 泛发性脓疱型银屑病（GPP）是一种罕见但临床症状十分严重的炎症性皮肤病，有时甚至危及到患者的生命，本文主要目的是对新发现的IL36RN基因的单核苷酸突变的致病性机制进行研究。 方法： 从患者及其父母的外周血中提取基因组DNA，用PCR的方法扩增和DNA测序包含IL36RN基因所有的编码区及邻近侧翼内含子序列的DNA片段以发现核酸变异；构建野生型和突变型的IL36RN基因的表达载体，转染培养的细胞并用Western Blot以及qPCR实验分别从蛋白质水平和mRNA水平来观察基因变异的作用；用蛋白质结构建模和分子动力学模拟进一步阐明突变致病的可能机制。 结果： 本文新发现了一个尚未报道过的IL36RN基因的单核苷酸突变c.59A>G；Western Blot实验结果表明该突变会减少IL36RN基因的蛋白表达量，而 qPCR实验则发现 c.59A>G突变并不会减少 IL36RN基因的转录；蛋白质结构建模和分子动力学模拟则提示该单核苷酸突变会增加IL36RN编码的蛋白IL36Ra的不稳定性。 结论： 错义突变p.Tyr20Cys可引起IL-36Ra降解并使突变c.59A>G成为功能丧失和致病性突变，这可能是GPP患者发病的遗传学基础。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 离心法增加HaCaT细胞的基因转染效率

1材料与方法

2结果

3讨论

第二部分 IL36RN基因突变鉴定及其致病机制的研究

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

全文总结

文献综述:泛发性脓疱型银屑病的致病机制和当前的治疗方法

致谢

攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文题目